[发明专利]一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：包括包被有甲状旁腺激素片段抗原PTH（39-84）的单克隆抗体的磁微粒混悬液、甲状旁腺激素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的甲状旁腺激素片段抗原PTH（1-34）的单克隆抗体、发光底物A液、发光底物B液及洗液。

2.根据权利要求1所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒混悬液的磁微粒固相抗体的包被浓度为0.3μg/T。

3.根据权利要求1所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：所述甲状旁腺激素系列校准品是采用PH为7.4的Tris稀释液基质，加入甲状旁腺激素WHO标准品、牛血清白蛋白及稳定剂配制而成。

4.根据权利要求3所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为EDTA稳定剂。

5.根据权利要求1所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的甲状旁腺激素片段抗原PTH（1-34）的单克隆抗体采用的标记方法为过碘酸钠氧化法。

6.根据权利要求1所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒，其特征在于：所述洗液为含有稳定剂和表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

7. 一种根据权利要求1所述的甲状旁腺激素定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤如下：

第一步，包被有甲状旁腺激素片段抗原PTH（39-84）的单克隆抗体的磁微粒混悬液的制备

根据使用量称取羧基磁微粒，用过量的EDC和NHS在酸性条件下进行活化，活化完成后，加磁场，静置是磁微粒与液体分开，弃去上清，用PH为7.6的0.01M的PBS缓冲液洗涤以洗去多余的活化剂；加入甲状旁腺激素片段抗原PTH（39-84）的单克隆抗体，使其浓度为0.3μg/T，在酸性条件下振荡反应；反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1%牛血清白蛋白的0.01M的PBS缓冲液进行封闭，并加入封闭液以保存磁微粒，使磁微粒的最终浓度为0.5mg/ml；将该磁微粒混悬液置于2-8度保存，以备使用；

第二步，甲状旁腺激素系列校准品的制备

用PH7.4 0.5M Tris缓冲液加入1%牛血清白蛋白，再加入1%浓度的EDTA稳定剂配成校准品稀释液，甲状旁腺激素WHO标准品用上述稀释液配制成标示浓度为的3000pg/ml、1000pg/ml、250pg/ml、50pg/ml、10pg/ml的一系列校准品；

第三步，辣根过氧化物酶标记的甲状旁腺激素片段抗原PTH（1-34）的单克隆抗体的制备

（1）醛化酶溶液的制备

秤取5mgHRP加入0.5ml PH为5.6的0.2M HAcB溶解后，加入0.06M过碘酸钠溶液0.5ml，4℃氧化15-30min，加乙二醇-氯化钠溶液0.5ml，室温作用20-30min，加入无水乙醇6.0ml混匀，1200-1500rpm离心10-15min左右，加水2.5ml溶解沉淀，即得醛化酶溶液，其浓度约为1mg醛化酶/0.5ml；

（2）醛化酶与抗体结合

将甲状旁腺激素片段抗原PTH（1-34）的单克隆抗体加入醛化酶溶液中，再加入0.5MPH9.6的碳酸盐缓冲液调节PH至8-9，于4-5℃，12-14h，加等量甘油混合后于-10度保存备用。