[发明专利]一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒及其制备方法。本发明甲状旁腺激素定量检测试剂盒包括包被有甲状旁腺激素片段抗原PTH（39‑84）的单克隆抗体的磁微粒混悬液、甲状旁腺激素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的甲状旁腺激素片段抗原PTH（1‑34）的单克隆抗体、发光底物A液、发光底物B液及洗液。本发明甲状旁腺激素定量检测试剂盒具有反应速度快，反应时间短、成本低、制备方法简单等优点。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲状旁腺激素（PTH）是由甲状旁腺主细胞分泌的84个氨基酸组成的单链多肽，贮存于胞质分泌颗粒或微泡中。分子中不含胱氨酸和酪氨酸，分子量约为9.5KD，其编码基因定位于11号染色体的短臂上，甲状旁腺激素是生物体内调节钙、磷代谢的重要激素之一，在调节生物体骨代谢中发挥重要作用。

甲状旁腺激素作为一种尿毒症毒素，可引起多种器官损伤，如肾性骨病，也脏肥大，软化等，因此，甲状旁腺激素检测可用于辅助诊断各种原因导致的甲状旁腺功能亢进与减退，高、低巧血症的病因及区分是否与甲状旁腺有关。同时，甲状旁腺激素检测是临床上诊断，检測肾性骨病的重要手段。PTH水平也可用来监测甲状旁腺肿瘤术后或其他治疗的疗效。

甲状旁腺激素的检测伴随标记免疫技术的发展经历了以下几个阶段。上世纪60年代，第一代检测方法采用放射竞争免疫法测定，所用的抗体主要是针对PTH免疫源性较强的中间段或羧基端，检测的物质为完整PTH分子和羧基端片段的总和，检测结果假性偏高，特别是在肾衰竭患者中羧基端片段浓度较高时，检测结果与临床相关性较差，不能反映肾性骨病的真实状态。随着免疫检测技术的进步，20世纪80年代免疫放射定量检测法定量检测甲状旁腺激素的方法应运而生，采用双抗体夹也法、酶免免疫法、化学发光法或者电化学发光法进行检测，其特点为两个抗体分别结合PTH的氨基端和羧基端，第二代检测方法的检测特异性和灵敏度较第一代有了大幅的提升。如Scantibodies公司研发的整分子甲状旁腺激素检测试剂盒，一个多抗结合位点位于1-34为氨基端之间，另一个多抗结合位点位于39-84氨基酸之间；而罗氏公司的电化学发光试剂盒采用的两个抗体的结合位点则分别定位于26-32和55-64位氨基酸之间。此后较长的一段时间内，这种＂双抗体夹心＂的检测方法一直被认为检测的目标物是整分子甲状旁腺激素，即PTH（1-84）。但是研究结果表明，第二代检测方法测得的结果与骨活检的结果不相符，后期研究逐渐证实终末期肾病患者测得的结果易出现偏高的情况。后续的研究表明，与整分子PTH不同的是，PTH（7-84）不能激活腺苷酸环化酶，被称为CPI，而整分子PTH，即PTH（1-84）具有激活腺巧酸环化酶的活化被称为CAP，这也解释了为什么第二代甲状旁腺激素检测在ESRD患者人群中检测结果与骨活检结果不相符。2000年后，研究人员经过努力开发出了结合位点定位于PTH前６个氨基酸残基的抗体，使得只检测整分子的PTH，即PTH（1-84）成为可能，被称为＂第三代＂PTH检测或者被制造商命名为＂生物活性完整ＰＴＨ检测。但是第三代PTH在临床检验中不常使用，研究表明，在健康人群和慢性肾病人群中第二代和第三代PTH检测结果有很好的相关性，但是第三代PTH检测结果相对第二代PTH检测偏低40-50%，专家推荐在更确定的骨活检证据发布前仍然采用第二代PTH检测用于正常人和慢性肾脏疾病病人的评价。

目前国内临床检验广泛使用的PTH诊断试剂均为前述第二代PTH检测方法，基本为国际诊断巨头所垄断（据SFDA），国际诊断巨头均为全自动、封闭式、磁微粒化学发光诊断系统，价格高昂，是导致我国看病贵的难题的原因之一，一定程度上限制了我国检验和卫生事业的发展。国内仅有1个厂家注册有PTH半自动诊断试剂，未得到临床检验的认可和广泛使用。临床迫切需求成本经济、质量可靠的国产诊断试剂。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种甲状旁腺激素定量检测试剂盒。本发明甲状旁腺激素定量检测试剂盒具有反应速度快，反应时间短、成本低等优点。