[发明专利]西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法

权利要求书

1.一种西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法，其特征在于，包括步骤：

a.确定高效液相色谱条件，高效液相色谱条件：Ultimate XB C18色谱柱；柱温：30℃；流动相：0.4％甲酸-甲醇，梯度洗脱，0-60min，甲醇浓度：20％-100％；DAD波长范围200～600nm，检测时间在0-25min内测定波长为260nm，25-29min之间测定波长为440nm，29-36min之间测定波长为260nm，36-40.5min之间测定波长为440nm，40.5-42.5min之间测定波长为310nm，42.5-60min之间测定波长为440nm；流速：0.8mL·min^-1；进样量：10μL；

b.确定质谱条件；

c.制备供试品溶液，称取西红花样品粉末10mg，精密称定，置25mL棕色量瓶中，加甲醇20mL，冰浴超声处理30min，放置室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，得到供试品溶液；

d.制备色味混合对照品和藏花醛对照品溶液；

e.取对照品和西红花样品溶液进样分析，得对照品和西红花样品高效液相色谱图和质谱总离子流色谱图，首先基于液相色谱的在线紫外图谱判断化合物的结构类型，再利用波峰在正负离子模式下离子裂解规律推断化合物的结构；

f.光谱和质谱分析西红花中的色谱峰特征；

g.建立西红花定量指纹图谱方法：

精密度试验：取同一供试品溶液按指纹图谱的色谱条件，连续进样6次，采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版计算其相似度；

稳定性试验：取同一供试品溶液，在步骤b中的色谱条件下分别在0、2、4、8、12、20、24h测定，记录色谱图，测定样品稳定性；

重复性试验：取西红花样品6份，精密称定，按照步骤c中的方法制备供试品溶液，按照步骤a中的液相色谱条件下进行测定，记录色谱图，考察实验方法的重复性；

h.西红花样品波长切换HPLC指纹图谱的建立和定量：取干品西红花，按步骤供试品溶液制备方法和检测方法进行检测，得到样品的高效液相色谱图，将西红花样品的高效液相色谱图谱信号数据导入国家药典委员会中药指纹图谱相似度评价系统2004A版软件进行处理，设定第一个样品为参照图谱，选取时间窗宽度为0.1min，对照图谱的生成方法为中位数，选择稳定性和重复性在0.999以上、吸收较强、特征明显的色谱峰为共有特征峰，进行多点校正，自动匹配，生成对照图谱，11个共有色谱峰为：苦藏花素、槐糖苷、trans-5-tG、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、trans-2-G、藏花醛、西红花苷-Ⅰ的顺式异构体、西红花苷-Ⅱ的顺式异构体以及trans-1-g；然后进行各样品的相似度评价，以供试品溶液指纹图谱中西红花苷-Ⅰ的保留时间及峰面积来计算其他共有峰相对保留时间和相对峰面积，并统计结果；

i.基于TOPSIS分析样品的质量优劣：

采用DPS数据处理系统，以28批样品中的7个指标成分组成28×11矩阵，基于TOPSIS通过Matlab软件编程实现其贴近度大小，利用贴近度对28批样品进行综合排序。

2.如权利要求1所述的西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法，其特征在于：所述步骤b中，所述质谱条件进一步为，离子源：大气压电喷雾离子源ESI；检测模式：正负离子；全扫描质核比：50-1200m/z；干燥气温度：350℃，干燥气流量：12.0L·min^-1，雾化气压力：35.0psi；毛细管电压：4.5kV；碰撞电压1.0V；进入质谱的流动相流速分流至0.4mL·min^-1。