[发明专利]西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法

说明书

本申请公开了一种西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法，本发明首先采用HPLC‑DAD‑ESI‑MSn技术对西红花中色、香、味的代表成分西红花苷、藏花醛和苦藏花素等化学成分进行分析和鉴别，鉴定了7种西红花苷类、苦藏花素、苦藏花素的苷元(HTTC)、藏花醛和2种山奈酚为苷元的黄酮类成分。在基于西红花中“色香味”多药效组分和质谱鉴定的基础上，利用波长切换HPLC‑DAD技术通过色香味多组分定量结合指纹图谱，构建了西红花的多组分质量评价方法，可对西红花进行较全面的质量分析，提高西红花临床应用的安全性和有效性。

技术领域

本发明涉及中药活性成分分析技术领域，具体地说，是涉及一种西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法。

背景技术

西红花(Crocus sativus L.)又称藏红花，以雌蕊上部三根红色柱头入药，具有独特的颜色、香气和苦味，价格昂贵，为名贵中药，也是世界上最名贵香料，目前从西红花中分离得到的化合物已达到50余种，主要可分为二萜类(以西红花苷类化合物为代表，为西红花红色的主要成分)、单萜类(以苦藏花素和藏花醛为代表，分别是西红花的苦味和香气成分)、黄酮类(以山奈酚为苷元)，其中西红花苷中的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦藏花素含量较高，三者之和可占干重的40％以上，其它化合物的质量比例都较小。作为食品添加剂的国际标准ISO 3632-2(2010版)，用分光光度法分别于λmax 440nm、λmax 330nm和λmax257nm测定西红花水提取液中色、香、味的代表成分西红花苷、藏花醛和苦藏花素的色价来进行质量控制与分级。规定西红花苷色价大于190，苦藏花素色价大于70，藏花醛色价介于20-50之间为一级品。但该方法专属性不强，不能精确表示色、香、味三类组分的含量，如西红花苷类，在257nm和330nm处也有吸收，存在干扰。

2015年版《中国药典》用HPLC法测定西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量，规定两者总含量大于10％为合格品，该标准只对西红花苷中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ进行含量控制，对其他西红花苷、苦藏花素、藏花醛等则没有规定。苦藏花素和藏花醛均具有较强的药理活性，为西红花的药效成分，并且苦藏花素在西红花中含量均较高，苦藏花素纳入西红花质量控制指标能更有效地控制和评价西红花药材的质量。

定量指纹图谱技术是以指纹图谱与多成分定量相结合的综合评价方法，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，且能够同时进行多种药效成分的定量分析，进而可以对药品质量进行整体描述和评价，体现出中药的整体观。文献报道，不同产地，不同质量等级的西红花所含化学成分的种类与数量有较大的差异，使用定量指纹图谱技术更能全面反映西红花药材质量，为临床安全、合理用药提供依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种测定西红花提取液中色、香、味的代表成分西红花苷、藏花醛和苦藏花素等多组份含量；对其他复杂成分利用指纹图谱进行质量控制的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种西红花色香味多组分定量结合指纹图谱质量评价方法，包括步骤：

a.确定高效液相色谱条件；

b.确定质谱条件；

c.制备供试品溶液；

d.制备色味混合对照品和藏花醛对照品溶液；

e.取对照品和西红花样品溶液进样分析，得对照品和西红花样品高效液相色谱图和质谱总离子流色谱图，首先基于液相色谱的在线紫外图谱判断化合物的结构类型，再利用波峰在正负离子模式下离子裂解规律推断化合物的结构；

f.光谱和质谱分析西红花中的色谱峰特征；

g.建立西红花定量指纹图谱方法：

精密度试验：取同一供试品溶液按指纹图谱的色谱条件，连续进样6次，采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版计算其相似度；