[发明专利]果蔬高效拮抗菌素保鲜剂及制备方法

权利要求书

1.一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：具体成分如下：

⑴由苏云金芽孢杆菌CICC 23702产生几丁质酶：

采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg²⁺、0.3％～0.5％的Mn²⁺以及0.2～0.3wt％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；在红光条件下，加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波进行细胞破碎并纯化以敲除几丁质酶杂基，然后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离；

⑵由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶

诱导条件：将10⁸spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶；

⑶防霉保鲜剂配方：重量份数

100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备拮抗菌素防霉剂置于0℃～4℃条件下保存；

⑷保鲜剂使用前首先进行抗菌酶复性

复性加入复性剂，复性剂为：将0.5～0.6份Mg²⁺、0.3～0.5份的Mn²⁺，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，混匀，调节pH 7.2～7.9。

2.根据权利要求1所述的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：所述步骤⑴的诱导培养液成分为：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌20min备用。

3.根据权利要求1所述的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：所述霉菌增殖培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。

4.根据权利要求1所述的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：所述防霉保鲜剂：复性剂重量分数比为：1-10：100。