[发明专利]果蔬高效拮抗菌素保鲜剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于果蔬采后保鲜生物防治技术领域，尤其是一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法。

背景技术

现有技术中有诸多的灰霉菌(Botrytis cinerea)染病实例，而且灰霉菌在诸多水果中都能繁殖和生长，产生病害。现有技术中通常是用化学药剂来抑制灰霉菌的生长，起主要确定体系在一下几个方面：

1、抗药性危害：长期使用化学药剂导致病菌产生的抗药性，降低了其防病效果，同时残毒量增加而威胁着人类的健康。

2、残留性危害：随着人们食品安全意识的加强，国内外对水果的农药残留要求也越来越严格，不使用化肥农药的绿色水果成为市场热门。

3、环境危害：频繁反复的是用化学防霉剂对环境造成不可逆的伤害，容易造成环境中的灰霉菌变异等生物灾害，同时也会竞争抑制环境中的其他有益菌的生长。

我国鲜食葡萄保鲜防腐技术越来越需要更加安全、环保的新技术，熏硫等化学剂防腐技术的被淘汰成为大势所趋，及时开展新型绿色防腐保鲜剂的研究具有十分重大的意义。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足之处，提供一种防霉效果好，复性效率高的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，具体成分如下：

(1)由苏云金芽孢杆菌CICC 23702产生几丁质酶：

采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg²⁺、0.3％～0.5％的Mn²⁺以及0.2～0.3wt％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；在红光条件下，加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波进行细胞破碎并纯化以敲除几丁质酶杂基，然后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离；

(2)由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶

诱导条件：将10⁸spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶；

(3)防霉保鲜剂配方：重量份数

100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备拮抗菌素防霉剂置于0℃～4℃条件下保存；

(4)保鲜剂使用前首先进行抗菌酶复性

复性加入复性剂，复性剂为：将0.5～0.6份Mg²⁺、0.3～0.5份的Mn²⁺，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，混匀，调节pH 7.2～7.9。

而且，所述步骤⑴的诱导培养液成分为：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌20min备用；

而且，所述霉菌增殖培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。

而且，100重量份数复性剂可以复性1-10重量份保鲜剂。

本发明的优点和积极效果如下：

本发明采用高产几丁质酶的菌种以及高效生产培养基来生产几丁质酶，能够大幅提高产率。

本发明的保鲜剂生产后形成干燥的粉末，非常容易保藏，常温保存即可，不需要特殊条件，使用时直接喷洒至葡萄表面，延长果蔬尤其是葡萄的保存期限。

本发明通过在培养基中增加诱导离子，同时辅以红光诱导，能够使几丁质的产量增加20％左右。经过高频超声的震荡，不仅能劈碎细胞，还能将几丁质上的杂基团震荡下去，提高几丁质酶的活性，保证生物保鲜剂的有效性。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。