[发明专利]人工表皮片、其制备方法与应用

权利要求书

1.一种人工表皮片，其包含：活的黑素形成细胞和表皮细胞，其中，所述人工表皮片不包含动物源性的血清和蛋白质以及营养支持细胞。

2.如权利要求1所述的人工表皮片，其特征在于，所述人工表皮片不包含脑衍生物质和动植物源性的过敏原物质；在另一实施方式中，所述人工表皮片还包含用于支持所述黑素形成细胞和表皮细胞的支持材料，例如纤维蛋白凝胶。

3.一种制备人工表皮片的方法，其包括如下步骤：

(i)皮肤组织预处理：用酶溶液处理以分解皮肤组织，获得包含活细胞的制备物；

(ii)细胞增殖与分化：使所得制备物中的细胞增殖，并分化为黑素形成细胞和表皮细胞，进一步使所述细胞多层化以形成含有黑素形成细胞的人工表皮片；

其中，所述方法不采用动物源性的血清、蛋白质以及营养支持细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在用酶溶液分解皮肤组织之后，采用酶抑制剂完全抑制胰蛋白酶活性，随后进行细胞增殖与分化；在另一个实施方式中，所述方法还包括在细胞增殖与分化之后进行调配步骤，所述调配步骤将分化的细胞或碎片化的细胞皮片包埋进入适当载体，例如纤维蛋白中，获得含有分化细胞的载体。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶溶液包含蛋白水解酶，所述蛋白水解酶包括中性蛋白酶(例如，分散酶)、胰蛋白酶、胶原酶中的一种或多种。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述分化过程中，逐步将分化培养液相对于增殖培养液的占比提高，例如，细胞分化过程中添加的分化培养液与增殖培养液的体积比从1:2逐步过渡至全部为分化培养液，例如从1:1到2:1，再到3:1，最终达到全部为分化培养液；优选地，所述分化培养液在基础培养液的基础上还包含：胰岛素、促肾上腺皮质激素、全铁转铁蛋白和维生素D。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞增殖的过程中，对所述细胞的传代不超过5代；其中，传代后采用的增殖培养液在传代前采用的增殖培养液的基础上另添加干细胞培养因子SCF和Wnt-3a。

8.如权利要求3-7中任一项所述的方法制备获得的人工表皮片。

9.如权利要求1所述的人工表皮片或如权利要求8所述的人工表皮片在制备针对以皮肤黑素细胞缺失为特征的疾病(例如，白癜风)或状况的产品中的应用。

10.如权利要求1所述的人工表皮片或如权利要求8所述的人工表皮片在筛选用于皮肤疾病或状况的药物或化妆品中的应用。