[发明专利]人工表皮片、其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品领域；具体地，涉及共同培养表皮细胞与黑素形成细胞以形成人工表皮片的方法，以及上述人工表皮片在医疗、美容和/或物质筛选中的应用。

背景技术

皮肤指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤覆盖全身，它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭。由于外界原因和/或生物体自身原因，皮肤可能会发生各种损伤和/或病变，其中有些损伤或病变不仅涉及皮肤表皮细胞，还涉及皮肤中的黑素细胞的缺失或损伤(例如白癜风)。

普通白癜风是一种因皮肤黑素细胞缺失所致的疾患。其主要病因是黑素细胞自毁，从而被视为一种自身免疫疾病。白癜风的患部会因黑色素缺失而形成白斑，从而与身体其它部位产生明显色差。

目前，针对白癜风一般会采用涂抹甾类化合物软膏、活性型维他命软膏等药物的治疗方式，有时也会采用他克莫司等免疫抑制剂来进行治疗。此外，现有疗法还包括：PUVA疗法、短波长紫外线疗法，以及症状发展至全身时采用的内服甾类化合物的疗法。然而，上述疗法均存在疗效不足、治疗后患部仍逐步扩大等问题。

然而，当身体开始对药物产生耐药性时，上述疗法无法达到预期效果，且症状将逐步扩大。在此情况下，可采用另一种疗法，即从患者正常部位获取皮肤，并进行移植。这种疗法的缺点在于，无法进行大面积的移植¹。

还可采用的另一种疗法是：从患者患部以外的、不明显的正常身体部位采集一小块皮肤，利用该皮肤进行角质形成细胞培养，并将培养获得的表皮皮片移植到患部。研究结果表明，这种疗法对于节段型白癜风有效。其之所以有效，主要是基于白癜风的病理学：攻击自身黑素细胞的免疫细胞侵入表皮，这不仅 造成黑素细胞的死亡，连周边的角质形成细胞也一同被杀灭²。许多报告表明，白癜风中，患部的角质形成细胞也受到损伤^3-7。

据研究报道，正常情况下，角质形成细胞在UVB的照射下会释放出多种物质，这些物质会促进毛囊部黑素形成细胞的增殖和分化^8,9。然而，受损的角质形成细胞则缺失上述能力，这也是大多数UVB疗法失效的原因。相反，只要将患部的角质细胞替换成正常的表皮角质细胞，就能够治疗白癜风。这就是移植正常表皮皮片能够治愈白癜风的原因之一。

然而，上述这种疗法的有效性仅限于针对节段型白癜风的治疗，其对于出现在两侧的全身型白癜风是无效的。

根据如前文献报道，白癜风患部的黑素细胞会因受到免疫细胞的攻击而死亡。不过，在毛囊根部区域可能仍存在一些不具有被免疫细胞识别的抗原的黑素形成细胞，因为未受到攻击而得以生存。由此，多数的UVB疗法也正是利用该原理，使该部位的表皮细胞活化，分泌对黑素形成细胞的移动、分化和/或成熟有利的细胞因子，使黑素形成细胞产生黑色素。但是，如果该部位的黑素形成细胞也受到伤害，则不仅UVB疗法会失效，移植正常的角质形成细胞也仍然达不到治疗效果。而在仅仅移植黑素细胞的情况中，若免疫细胞活动频繁，黑素细胞的存活率也会受到免疫细胞攻击的影响而低下¹⁰。

目前，虽然已报道了几种无血清、无饲养层细胞的皮肤角质形成细胞培养方法，但是在无血清的状态下使细胞分化，并由此获得可以进行移植的皮片的培养方法至今无报道。并且，本领域中也从未曾尝试并开发出使这样的皮片中含有黑素形成细胞，并使其与表皮细胞共同增殖、分化的培养方法。

因此，本领域仍需要用以治疗白癜风的高安全性新型产品和技术手段。并且，除了针对白癜风之外，本领域也仍需要用于治疗或美化其他涉及皮肤表皮以及黑素形成细胞受损的皮肤症状和/或疾病(例如皮肤烧伤、灼伤、疤痕等)的高安全性新型产品和技术手段。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种人工表皮片，所述人工表皮片的培养与制备过程安全性高。并且，所制得的人工表皮片还包含黑素形成细胞，这对于需要皮肤移植和/或皮肤修补的疾病(如白癜风)和/或状况(如美容相关状况)而言是极为有利的。

本发明的第一方面提供一种人工表皮片，其包含：活的黑素形成细胞和表皮细胞，其中，所述人工表皮片不包含动物源性的血清和蛋白质以及营养支持细胞。

在一些实施方式中，所述人工表皮片不包含脑衍生物质和动植物源性的过敏原物质；在另一实施方式中，所述人工表皮片还包含用于支持所述黑素形成细胞和表皮细胞的支持材料，例如纤维蛋白凝胶。

本发明的第二方面提供一种制备人工表皮片的方法，其包括如下步骤：