[发明专利]一种小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法

权利要求书

1.一种小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)腹腔注射戊巴比妥钠处死小鼠，酒精消毒后迅速取出小肠，预冷PBS冲洗肠腔至流出液变清；(b)小肠纵向剖开，加入EDTA震荡温育；(c)静置弃上清，加入混合酶液消化；(d)连续筛网过滤；(e)滤液经Ficoll分离，清洗2-3次；(f)完全混合培养基重悬细胞沉淀，接种于培养瓶中；(g)差速贴壁法获得小肠巨噬细胞。

2.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述的小鼠为6-8周龄，体重22-28g的小鼠。

3.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中EDTA的使用量为0.1％-0.15％。

4.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中震荡温育的方法为消化时间45min-1h。

5.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中混合酶液为1.5-2％胶原酶IA、2％-2.5％的IV型胶原酶和1.5％-2.5％的II型胶原酶和0.1％-0.15％的透明质酸酶，消化时间为50min-1h。

6.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤d连续筛网过滤的方法为，消化后的组织液依次经过100目、200目、400目筛网过滤，收集滤液。

7.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤f中混合完全培养基为含5％FBS和5％FCS的DMEM/1640(1∶1)。

8.根据权利要求1所述的小鼠小肠巨噬细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤g中差速贴壁的方法为混合完全培养基重悬接种后，培养2-4h后更换新鲜完全培养基。