[发明专利]一种用于牙周组织再生的膜状生物修复材料

权利要求书

1.一种用于牙周组织再生的膜状生物修复材料的制造方法，其特征在于：

步骤一、获取牙周膜脱细胞基质微粒：

收集因正畸需要拔除的健康前磨牙，用手术刀片刮取根的牙周膜，接种于T25培养瓶，加入含15％胎牛血清的α-MEM培养液，待组织块贴壁后缓慢翻转培养瓶，37℃，5％CO₂，95％空气，饱和湿度的标准环境静置培养，每3d换液1次，细胞生长至局部汇合时，pH＝6.4的胰酶消化传代，标记为原代牙周膜细胞，传代培养；

然后，将第三代牙周膜细胞制成单细胞悬液，按照2.5*10⁴/cm²密度接种于培养皿，静息24小时后，在完全培养基中加入50-200μg/ml维生素C，另外，还加入10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、10^-8mol/L地塞米松，培养牙周膜干细胞1.5-2周形成细胞膜片；

将经上述扩增获得的细胞膜片用PBS漂洗三次，加入含0.5-1％Triton X-100的浓度为20mM的一水合氨，常温下振荡24小时，每8小时换液一次；PBS漂洗三次，加入含DNA酶和RNA酶的CaCl₂/MgCl₂溶液中，在37℃下振荡24小时，每8小时换液一次；PBS漂洗三次,冻干处理，制得牙周膜脱细胞基质薄片；

收集冻干的牙周膜脱细胞基质薄片，研磨后溶解于1mg/ml蛋白酶溶液中，调整牙周膜脱细胞基质的浓度为5～10mg/ml，均浆机粉碎后，常温下振荡至肉眼看不到颗粒，调整pH值调整为7.4，再进行冻干处理，得到牙周膜脱细胞基质微粒；

步骤二、静电纺丝纤维膜的制备：

将上述牙周膜脱细胞基质微粒，与聚己内酯进行混合，加入到三氯甲烷中，其中，牙周膜脱细胞基质微粒与聚己内酯的质量之和为共混液质量的5-20％，且聚己内酯的质量与牙周膜脱细胞基质微粒质量比为1:1、1:3、1:2、2:1或3:1，在室温下置于磁力搅拌器上搅拌3小时至溶液呈无色透明黏稠状，制得纺丝液；

在常温常压环境，将纺丝液加入纺丝管中，调节喷丝口与接收板的距离为15cm，电场强度为15kV，以10.7ml/h的流速进行静电纺丝，制得聚己内酯/牙周膜脱细胞基质微粒混合的静电纺丝支架。