[发明专利]一种用于检测水稻橙叶病植原体的引物、方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测水稻橙叶病植原体的引物，其特征在于，所述用于检测水稻橙叶病植原体的引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述下游引物具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

2.一种用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备如权利要求1所述的用于检测水稻橙叶病植原体的引物；

(2)提取待测样品的总DNA；

(3)配制PCR反应体系，进行PCR反应；

(4)电泳检测待测样品中是否含有水稻橙叶病植原体。

3.如权利要求2所述的用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取待测样品的总DNA的步骤为：

a.称取0.1g待测样本于研钵中，用液氮研磨成粉末状后转移至1.5mL离心管中，加入800μL的CTAB提取液，65℃温育30min，期间混匀5-6次；

b.加入等体积氯仿，充分混匀后，12,000rpm离心15min；

c.取上清，加入等体积的异丙醇，-20℃静置30min；

d.25℃离心15min后，将沉淀用75％乙醇洗2-3遍；

e.沉淀干燥后溶于50μL的灭菌ddH₂O中，溶解后将总DNA作为PCR扩增模板。

4.如权利要求2所述的用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR反应体系为：PCR混合液25μL，其中2×Taq PCR StarMix with loading Dye 12.5μL，如上述所述两条引物(使用浓度为10uM)各1μL，模板DNA 1μL及ddH₂O 9.5μL。

5.如权利要求2或4所述的用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR反应体系中的总DNA模板浓度不低于10^-1ng/uL。

6.如权利要求2所述的用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR反应的扩增程序：94℃预变性2min；随后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸60s；最后72℃延伸10min。

7.如权利要求2所述的用于检测水稻橙叶病植原体的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR反应的退火温度为53℃-60℃。

8.一种用于检测水稻橙叶病植原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒具有如权利要求1所述的引物。

9.一种用于检测水稻橙叶病植原体的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片具有如权利要求1所述的引物。

10.一种如权利要求1所述的引物在检测水稻橙叶病植原体中的应用。