[发明专利]一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法

权利要求书

1.一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法，其步骤是：

A、鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素采用试剂A 15-30mL提取，经旋转蒸发仪将试剂挥干；

B、再经试剂B 1～10mL复溶旋转蒸发后的残渣，将复溶溶液转移到一支10mL塑料离心管中置40℃氮吹仪上氮吹至干，向10mL塑料离心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的残渣；

C、再加入1mL试剂D，涡旋振荡30s，7000r/min离心5min，将上层液体弃去；

D、用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头，过滤液：溶解有双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的溶液C，1mL放置到2mL进样瓶中，超高效液相色谱紫外法测定，获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图，通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积；

E、超高效液相色谱紫外法条件：流动相的有机相为试剂A，水相为溶液E，试剂A与溶液E的两者的体积比为45:55，流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波长为430nm，色谱柱：超高效液相色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18，进样量为5.0μL，获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图，通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积，再将峰面积代入鱼饲料基质标准曲线方程，计算出鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量；

F、鱼饲料基质标准曲线的绘制，分别在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的鱼饲料中添加系列浓度的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素后得到系列浓度的鱼饲料基质标准，以其浓度分别为横坐标X₁，X₂，X₃，双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积分别为纵坐标Y₁，Y₂，Y₃，绘制鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的基质标准曲线，获得鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的基质标准曲线方程；

G、将测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值代入基质标准曲线中，计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量；鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量超出本基质标准曲线的浓度范围，将前处理后得到的液体用定容溶液C稀释后进行测定，将测定值代入基质标准曲线方程计算得出浓度值再乘以稀释倍数即得到双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量；

所述的试剂A为乙腈；

所述的试剂B为乙醇；

所述的溶液C为试剂A和溶液E按体积比1:1混合而成；

所述的试剂D为正己烷；

所述的溶液E为0.1％乙酸水溶液。

2.根据权利要求1所述的一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法，其特征在于：计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量：鱼饲料中双去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X₁＝(Y₁+1800.7)/309.65，浓度范围为10μg/kg～10000μg/kg；鱼饲料中去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X₂＝(Y₂+3340.6)/260.88，浓度范围为10μg/kg～10000μg/kg；鱼饲料中姜黄素含量的计算公式为X₃＝(Y₃+14903)/1256.06，浓度范围为10μg/kg～10000μg/kg；X₁为双去甲氧基姜黄素的含量，X₂为去甲氧基姜黄素的含量，X₃为姜黄素的含量；Y₁为双去甲氧基姜黄素的峰面积，Y₂为去甲氧基姜黄素的峰面积，Y₃为姜黄素的峰面积。