[发明专利]一种以恶臭假单胞菌为出发菌株构建三氯丙烷降解菌的方法有效
| 申请号： | 201611048418.5 | 申请日： | 2016-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN106754591B | 公开（公告）日： | 2020-08-25 |
| 发明（设计）人： | 杨超;宫婷;宋存江;徐晓庆;左振强;刘瑞华 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/78;C12R1/40 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300071 天津市南*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 恶臭 假单胞菌 出发 菌株 构建 丙烷 降解 方法 | ||
【权利要求书】：
1.在恶臭假单胞菌中稳定高效表达三氯丙烷降解途径中三个基因dhaA31，hheC和echA的方法，其特征在于，对三个外源基因都进行了密码子优化，替换原始基因的启动子以及核糖体结合位点；使用无痕的插入方法将优化后的表达框分别整合至恶臭假单胞菌的基因组中，获得了稳定且高效表达三氯丙烷降解基因的工程菌株；
所述优化后的密码子序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；
所述启动子序列为：
所述无痕插入法为将读码框与线性化的带有反向筛选标记upp的自杀质粒pKU相连获得敲除质粒，通过电击转化将敲除质粒导入宿主菌株Pseudomonas putida；所述读码框为带有插入位点上下游同源臂的插入基因读码框。
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