[发明专利]提高基因组覆盖度的单细胞全基因组扩增及文库构建方法有效
| 申请号： | 201611050351.9 | 申请日： | 2016-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN108103052B | 公开（公告）日： | 2021-05-07 |
| 发明（设计）人： | 梁峻彬;张超;洪燕;刘涛;玄兆伶;李大为;陈重建 | 申请（专利权）人： | 浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达基因科技（北京）有限公司;安诺优达（义乌）医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京彩和律师事务所 11688 | 代理人： | 闫桑田 |
| 地址： | 322000 浙江省金华市义*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 基因组 覆盖 单细胞 扩增 文库 构建 方法 | ||
1.一种单细胞基因组扩增方法，其采用多重置换扩增方法对单细胞基因组进行扩增，其包括：
使一组引物、DNA聚合酶和单细胞基因组在溶液中接触；以及
对所述溶液进行扩增，使得进行所述单细胞基因组的扩增反应；
其中，
所述扩增的时间为0.5小时以上且2小时以下。
2.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述扩增的时间为0.7小时以上且1.5小时以下。
3.根据权利要求1或2所述的扩增方法，其中，所述引物为具有随机核苷酸的核苷酸序列。
4.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述引物具有5～10个碱基的长度。
5.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述引物具有6个碱基的长度。
6.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述扩增反应是等温扩增。
7.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述扩增反应在促进所述引物与所述单细胞基因组杂交的条件下进行。
8.根据权利要求1所述的扩增方法，其中，所述DNA聚合酶选自Phi29DNA聚合酶、TtsDNA聚合酶、M2DNA聚合酶、VENT DNA聚合酶、T5DNA聚合酶、PRD1DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶以及REPLI-g sc DNA聚合酶。
9.一种单细胞基因组测序用DNA文库的构建方法，其包括：
采用权利要求1～8中任一项所述的扩增方法对单细胞基因组进行扩增，得到单细胞基因组扩增产物。
10.根据权利要求9所述的构建方法，其还包括：
将所述单细胞基因组扩增产物片段化，得到片段化产物；
将所述片段化产物进行末端修复，得到末端修复产物；将所述末端修复产物进行3'端加A，得到3'端加A产物；
将所述3'端加A产物进行加接头，得到加接头产物；以及
将所述加接头产物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
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