[发明专利]一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法

说明书

本发明提供一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法，具体步骤为：1）菌种活化；2）摇瓶种子培养；3）发酵培养；4）分离纯化木耳黑色素；5）分离纯化木耳多糖。本发明的有益效果为：黑木耳菌可同时产生木耳黑色素和木耳多糖，直接从发酵液中提取黑色素和木耳多糖；发酵培养基能诱导黑木耳菌分泌黑色素和木耳多糖，使其分泌黑色素和木耳多糖的量增加，其他对本产品优良品质无关的物质分泌量减少，提高了产品发酵效率，缩短了产品制备时间；分离纯化得到的产品纯度高，结构不会被破坏，活性强，提取率高。

技术领域

本发明属于生物发酵领域，具体涉及一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法。

背景技术

黑木耳（Auricularia auricula）又名细木耳、川耳、云耳，别名黑菜、木蛾、树鸡、木菌、耳子、光木耳、榆耳、桑耳等，因其侧生于树木上，形似人耳而得名。是我国传统的药食两用真菌，营养丰富，具有益气强身、补气血、润肺、止血、止痛、通便等功效，是我国一种重要的中药资源。

研究表明木耳菌中的主要活性成分为黑色素、木耳多糖、氨基酸、微量元素等。黑色素具有抗氧化、清除自由基、刺激免疫、诱导肿瘤坏死因子TNF-a 和白介素IL-6 的合成、保护肝脏、防紫外线辐射等生物活性。木耳多糖具有提高免疫、降血脂、抗血栓、抗衰老、降血糖、抗凝血、抗氧化、抗辐射以及止血等活性。

近几年，以木耳菌为出发菌，发酵法生产木耳菌丝体、多糖和黑色素已有研究报导，现有技术如授权公告号为CN102766658B的中国发明专利，公开了一种发酵法制备黑木耳黑色素的生产工艺，其特征是以麦麸汁为主要成分，添加干酪素、硫酸铜、磷酸二氢钾等组成发酵培养基，接种黑木耳(Auricularia auricula) 菌丝体，经液体深层发酵，分离纯化和冷冻干燥制得纯度高、食用安全的黑木耳黑色素。本发明制备黑木耳黑色素具有生产周期短、成本低、产量高和便于后续加工等特点，黑木耳黑色素产品呈粉末状，纯度达70~85％，产量为900~1100mg/L。现有技术如授权公告号为CN103641924B的中国发明专利，公开了一种从木耳中提取木耳多糖的方法，其是选取干木耳为原料，经浸泡、清洗、捣碎后加入纤维素酶，控制酶解条件酶解破除细胞壁；酶解后的木耳渣采取热水浸提；木耳酶解液与木耳浸提液合并后经过滤，再加入鞣酸溶液去除过滤液中的蛋白，离心收集的多糖溶液采用乙醇溶液醇沉；最后经真空干燥而成多糖产品。本发明的提取方法工艺合理，操作简单，成分保留全面，多糖得率及纯熟高，产品安全性好。

现有的研究都只涉及发酵法单独生产木耳多糖或黑色素，由于木耳多糖和黑色素分别为初级代谢产物和次级代谢产物，两者发酵生产的菌株、发酵条件不一，需要筛选能同时高产木耳多糖和黑色素的菌株，并综合考察同时优化木耳多糖和黑色素的生产条件。木耳多糖和黑色素都是具有良好应用前景的生物活性物质，以液体发酵法同时生产木耳多糖和黑色素可同时获得这两种物质，但目前尚无有关以液体发酵法同时生产木耳多糖和黑色素的研究报导。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时提取黑色素和木耳多糖，且二者量高、纯度高的一种同时生产黑色素和木耳多糖的方法。

本发明针对背景技术提到的问题，采取的技术方案为：以黑木耳菌为出发菌株，经斜面菌种活化，进行液体摇瓶培养及发酵培养获得木耳菌发酵液，从所得发酵液中经分离纯化后分别获得木耳多糖和黑色素。

具体地，本发明以液体发酵法同时生产木耳多糖和黑色素的工艺中，所采用的菌种黑木耳菌（Auriculariaauricula）于2014年9月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCCNo.9711。

具体操作步骤为：