[发明专利]高通量快速筛选阳性杂交瘤细胞的方法及系统

说明书

本发明公开了一种高通量快速筛选阳性杂交瘤细胞的方法，其包括：提供三维细胞培养芯片，其包括选定基底以及形成于选定基底表面的图纹结构，所述图纹结构包括由若干图案形成的阵列，所述图案由至少能够促使单细胞附着的修饰剂组成；在所述芯片表面施加细胞悬浮液，再进行细胞培养，之后去除多余细胞，获得单细胞阵列；将基质胶施加到所述芯片表面，并将所述图纹结构完全覆盖，其后孵育至所述基质胶充分固化；以细胞培养完全培养基覆盖所述固化的基质胶，并持续培养，之后甄选阳性杂交瘤细胞进行后续处理。本发明还公开了一种相应的系统。本发明的方法操作简单，培养周期短，无需饲养细胞，且能大幅提高杂交瘤筛选通量，减小筛选结果的假阳性率。

技术领域

本发明涉及一种生物芯片，特别涉及一种能够高通量快速筛选分泌单克隆抗体杂交瘤细胞的方法及系统。

背景技术

自从科学家Kohler和Milstein于1975年创建单克隆抗体(McAb)技术以来，该技术不断发展完善，应用也日益广泛。能分离稳定高效分泌抗原特异性抗体的融合杂交瘤细胞是最终是否能纯化得到有效单克隆抗体的关键步骤。

目前，杂交瘤细胞的筛选和克隆化方法有有限稀释法、流式细胞术筛选法、半固体培养法、微流控法以及微井法等。但这些方法各有缺陷。例如，有限稀释法的假阳性率高、耗时长、工作量大、操作繁琐且成本高；流式细胞术筛选法所需设备昂贵，成本较高，材料来源质量难以控制；半固体培养法中的杂交瘤细胞分布不均，降低了细胞筛选通量，细胞生长受限，克隆挑选困难及不易检测；微流控法的细胞污染可能性大，通量低；而微井法的成本高，过程中仅仅依靠重力作用，较难控制。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种高通量快速筛选阳性杂交瘤细胞的方法及系统，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种高通量快速筛选阳性杂交瘤细胞的方法，其包括：

提供三维细胞培养芯片，所述芯片包括选定基底以及形成于所述选定基底表面的图纹结构，所述图纹结构包括由复数个图案形成的阵列，所述图案由至少能够促使单细胞附着的修饰剂形成；

在所述三维细胞培养芯片表面施加细胞悬浮液，再置于细胞培养环境中进行细胞培养以使所述的各图案捕获单细胞，之后去除多余的细胞，获得单细胞阵列；

将基质胶施加到所述三维细胞培养芯片的表面，并至少将所述选定基底表面的图纹结构完全覆盖，其后置入细胞培养环境中孵育至所述基质胶充分固化；

以细胞培养完全培养基覆盖所述固化的基质胶，并在细胞培养环境中持续培养，之后甄别和挑取阳性杂交瘤细胞并进行后续处理。

进一步的，所述基质胶还包含能与所述阳性杂交瘤细胞分泌的抗体特异性结合的抗原。

优选的，所述抗原上还修饰有用于指示有无所述阳性杂交瘤细胞分泌的抗体与所述抗原特异性结合的标记性物质。

进一步的，所述选定基底表面上除所述图纹结构所在区域之外的其它区域具有排斥细胞的特性。

进一步的，所述的后续处理包括：对挑取出的阳性杂交瘤细胞并进行单克隆培养或抗体轻重链基因扩增。

本发明实施例还提供了一种高通量快速筛选阳性杂交瘤细胞的系统，其包括：

三维细胞培养芯片，包括选定基底以及形成所述选定基底表面的图纹结构，所述图纹结构包括由复数个图案形成的阵列，所述图案由至少能够促使单细胞附着的修饰剂形成；

基质胶，至少能够将所述选定基底表面的图纹结构完全覆盖，并能在细胞培养环境中固化；

以及，细胞培养完全培养基，至少能够完全覆盖固化的基质胶。