[发明专利]高产白藜芦醇突变体筛选方法的建立

权利要求书

1.调控蛋白基因ttgR的突变体，其特征在于编码序列如SEQ ID NO:9所示，其编码的氨基酸序列相对于野生型调控蛋白TtgR而言，第38位氨基酸由丙氨酸突变为了苏氨酸，其中所述野生型调控蛋白TtgR由SEQ ID NO:5编码。

2.4CL1酶的突变体，其特征在于选自由以下各项组成的组：

(1)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第169位氨基酸由Glu突变为Asp，第536位氨基酸由Phe突变为Tyr；

(2)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第48位氨基酸由Ile突变为Ser，第112位氨基酸由Phe突变为Leu或Trp；

(3)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第250位氨基酸由Ile突变为Leu，第404位氨基酸由Asn突变为Lys，第461位氨基酸由Ile突变为Val；

(4)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第31位氨基酸由Asp突变为Thr，第510位氨基酸由Ser突变为Gln；

(5)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第221位氨基酸由Met突变为Phe；

(6)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第48位氨基酸由Ile突变为Ser，第112位氨基酸由Phe突变为Leu，第169氨基酸由Glu突变为Asp；第536位氨基酸由Phe突变为Tyr；

(7)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第250位氨基酸由Ile突变为Val，第404位氨基酸由Asn突变为Tyr，第461位氨基酸由Ile突变为Val；

(8)相对于氨基酸序列由SEQ ID NO:27所示的野生型4CL1而言，第250位氨基酸由Ile突变为Val，第404位氨基酸由Asn突变为Lys，第461位氨基酸由Ile突变为Val。

3.质粒，其选自以下各项：

pTtgR，其序列如SEQ ID NO:6所示；

pTtg，其通过如下方法制备：以DsRed载体为模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2为引物进行PCR扩增，PCR体系：引物各0.2μM，dNTPs 0.2mM，模板10ng，10×Pyrobest Buffer 5μL，Pyrobest 0.3μL，去离子水将体积补至50μL，PCR反应条件为：94℃30s，50℃30s,72℃1min,以上程序30个循环，得到的PCR产物用SacII进行酶切后，用T₄ DNA连接酶4℃连接4h，连接产物转入大肠杆菌MC1061，获得重组菌，提取重组菌的质粒得到pTtg。

4.权利要求1所述的调控蛋白基因ttgR的突变体，其在筛选用于提高白藜芦醇产量的4CL1酶突变体或筛选产生白藜芦醇菌株中的应用。

5.一种生产白藜芦醇的方法，其特征在于利用权利要求2所述的4CL1酶突变体。