[发明专利]一种猪细小病毒病活疫苗用稀释液

说明书

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪细小病毒病活疫苗稀释液，其每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：双花连翘提取物1‑5g、枸杞多糖5‑10g、黄芪皂苷Ⅱ 20‑80mg和聚肌胞1‑5g。本发明猪细小病毒病活疫苗用稀释液不仅生产方便，成本低，使用方便安全，还可以降低不同批次疫苗间的差异，提高疫苗免疫的整体效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪细小病毒病活疫苗用稀释液。

背景技术

猪细小病毒（Porcine parvovirus , PPV）属于细小病毒科( Paruovirdae )细小病毒属（Parvovirus），是引起猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一，尤其是初产母猪的繁殖障碍，表现为母猪受胎率降低，产活仔数减少和/或出现早产、流产、畸形胎、死胎、木乃伊胎、弱仔等。该病毒在环境中可存活数月之久，且对大多数消毒剂具有较强抵抗力，目前该病毒已遍布全世界，给养猪业带来巨大的经济损失，严重阻碍了养猪业的健康发展。PPV具有单一的血清型，免疫接种是预防本病的主要措施。

猪细小病毒病活疫苗在使用时需要用疫苗稀释剂进行稀释，目前通常选用注射用水或生理盐水，但这样稀释出的疫苗，免疫效价整齐度不高，不同批次疫苗间的差异较大，且接种发病猪后存在应激反应和过敏反应，大大降低了猪细小病毒病活疫苗的免疫效果。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种猪细小病毒病活疫苗用稀释液，该稀释液可有效减少不同批次疫苗间的差异，提高疫苗抗体效价整齐度，减少接种发病猪的应激反应和过敏反应。

为解决上述技术问题，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：双花连翘提取物1-5g、枸杞多糖5-10g 、黄芪皂苷Ⅱ 20-80mg和聚肌胞1-5g。

进一步的，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：双花连翘提取物2-4g、枸杞多糖6-8g 、黄芪皂苷Ⅱ 30-60mg和聚肌胞2-3g。

进一步的，本发明每1000ml PH=7的磷酸盐缓冲液中包含：双花连翘提取物3g、枸杞多糖7.5g 、黄芪皂苷Ⅱ 50mg和聚肌胞2.5g。

其中，本发明所述双花连翘提取物的提取包括以下步骤：按1:1的重量称取金银花和连翘，混合，加入10-12倍量50-60%的乙醇，超声提取10-15min，收集提取液，重复提取3次，将所得提取液混合，蒸发浓缩，冻干，即可得双花连翘提取物。

其中，本发明所述枸杞多糖的制备包括以下步骤：

（1）将枸杞置于60℃恒温箱中干燥至恒重，粉碎备用；

（2）预处理：称取步骤（1）中粉碎后的枸杞，用90%乙醇回流1h，弃去溶剂，收集残渣，将残渣风干备用；

（3）微波提取：称取步骤（2）中所制备的枸杞残渣，按料液比为1：8-15加入蒸馏水，以300-350W的功率微波提取5-10min，离心，去除沉淀，收集上清液；

（4）浓缩步骤（3）中所得上清液，再利用95%乙醇进行沉淀，将所得沉淀溶解于重蒸水，用Sevag法脱蛋白，脱蛋白步骤重复5次，得粗多糖溶液；

（5）向步骤（4）中所得粗多糖溶液中加入1%的木瓜蛋白酶，在60℃、pH=6.0的条件下酶解3h，干燥，即可得精制枸杞多糖。

其中，本发明所述pH=7的磷酸盐缓冲液的制备方法如下：

a．称取下列原料组分：氯化钠6-10g、氯化钾0.05-0.5g、磷酸氢二钠1-1.2g、磷酸二氢钾0.05-0.5g、氯化钙0.05-0.2g和六水氯化镁0.05-0.2g，混合均匀备用；