[发明专利]一种癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法和检测方法

权利要求书

1.一种癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于具体制备步骤如下，

步骤1：取聚邻苯二胺纳米微球0.013g，利用超声震荡分散在1mL的水中，并在室温下保存备用；

步骤2：将玻碳电极：用清洗剂超声清洗5～10min后，在沉积电位为1.75V下，0.1M pH＝5.0的PBS中，用线性扫描溶出伏安法沉积300s，得到处理后的玻碳电极；

步骤3：处理后的玻碳电极在扫描电位为+0.3～+1.3V，pH＝7.0的PBS中做循环伏安曲线直到获得稳定的电流电压曲线为止；

步骤4：:将此电极浸泡在20mM的戊二醛溶液中12～24h，得到戊二醛修饰的玻碳电极；

步骤5：用水充分清洗以除去玻碳电极上非化学吸附的戊二醛，把该电极浸入100μL HRP标记的CEA抗体溶液与200μL聚邻苯二胺纳米微球溶液的混合液中5～10h后得到聚邻苯二胺纳米微球/HRP标记的CEA抗体修饰电极；

步骤6：用水将电极冲洗干净，晾干；

步骤7：将制备好的免疫传感器浸泡于4℃ 0.1M pH＝7.0的PBS中，即可得到癌胚抗原电化学免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述聚邻苯二胺纳米微球的制备方法为：200μL 0.1M邻苯二胺加入3mL水中，向溶液中以30ml/min的速度通入臭氧并不断搅拌，在常温下搅拌3～5h后将反应得到的产物在7000G的重力加速度下离心5min，分离得到的沉淀物即是聚邻苯二胺纳米微球。

3.根据权利要求1或2所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述清洗剂超声清洗的步骤为：

步骤1，经过体积比为1:1的HNO₃清洗；

步骤2，然后通过甲苯或者无水乙醇清洗；

步骤3，最后通过纯水的清洗干净。

4.根据权利要求1或3所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，电极浸泡在20mM的戊二醛溶液中12h。

5.根据权利要求2所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述通入臭氧后的搅拌时间为5h。

6.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法，其特征在于，具体检测方法如下：

步骤1：取5μL的CEA标准样品配置成浓度为0.1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的溶液作为测试溶液，并在室温(25±1.0℃)下孵育10～60min；

步骤2：测试溶液在2.0mM H₂O₂和pH＝5.0～8.0无氧的PBS混合溶液中进行差分脉冲伏安扫描，其扫描电压为-0.5～-0.75V；

步骤3：启动电化学反应，分别测量0.1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的CEA溶液对应的电流强度，建立电化学电流强度与CEA溶液浓度之间的定量关系。

7.根据权利要求6所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法，其特征在于，所述测试溶液孵育时间为40min。

8.根据权利要求7所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法，其特征在于，所述无氧的PBS的混合溶液的pH＝7.0。