[发明专利]一种人核糖体蛋白S5的表达提取纯化方法

说明书

本发明涉及生物工程、特别是蛋白质工程技术领域。本发明提供一种人核糖体蛋白S5的表达提取纯化方法，本发明的人核糖体蛋白RPS5的原核表达不带标签，并通过工程菌破碎、变性蛋白阳离子交换层析纯化、变性蛋白阴离子交换层析纯化、变性蛋白复性以及凝胶过滤层析纯化，大大提高了人核糖体蛋白S5蛋白的表达量及总收率，也提高了最终产品的纯度，降低了生产成本，有利于大规模工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物工程、特别是蛋白质工程技术领域，涉及一种通过基因工程得到的重组蛋白－人核糖体蛋白S5的表达、提取、纯化方法。

背景技术

人核糖体蛋白S5(ribosomal protein S5,RPS5)是人类核糖体40S亚基上的一个蛋白，属于S7P核糖体蛋白家族，GenBank:AB061853.2；NCBI Reference Sequence:NM_001009.3。人们发现在肝硬化的肝星状细胞中该蛋白的表达异常，显示RPS5是潜在的药物作用靶点(参考文献：Wei-Heng Xu,Hong-Gang Hu,Yuan Tian,Shao-Zhan Wang,Jie Li,Jian-Zhong Li,Xing Deng,Hui Qian,Lei Qiu,Zhen-Lin Hu,Qiu-Ye Wu,Yi-Feng Chai,Cheng Guo,Wei-Fen Xie,and Jun-Ping Zhang.Bioactive Compound Reveals a NovelFunction for Ribosomal Protein S5 in Hepatic Stellate Cell Activation andHepatic Fibrosis[J].HEPATOLOGY.2014；60:648-660.)。中国发明专利申请CN201310057096.0公开了核糖体蛋白S5在催化蛋白质分子发生脱磷酸化反应中的用途，申请公布号为CN103160557A。

据文献报道，带有六聚组氨酸标签的RPS5已能大量表达并且形成包涵体，在变性条件下纯化后，通过稀释法复性(参考文献：Alexey Malygin,Oxana Baranovskaya,AntonIvanov,and Galina Karpova.Expression and purification of human ribosomalproteins S3,S5,S10,S19,and S26[J].ProteinExpression and Purification.2003；28:57-62.)，但是六聚组氨酸标签还得后期去除，不仅工艺复杂而且成本提高。另外，目前的重组表达的RPS5蛋白最终产品存在产量低、纯度低的缺陷。

不带标签的RPS5的表达纯化方法目前尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人核糖体蛋白S5的表达提取纯化方法。

本发明旨在提供一种不带标签的RPS5的制备方法，涉及人核糖体蛋白RPS5的原核表达载体构建、原核表达及提取、纯化、复性的方法；该方法能够有效解决RPS5蛋白最终产品产量低、纯度低的缺陷。

本发明人研究发现，不带标签的RPS5的表达纯化的技术难度主要在表达时培养基的优化、初步纯化后蛋白的复性等地方。本发明人设计阳离子交换层析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析相结合的技术方案，并进一步筛选了各步层析所用的方法和参数，特别改变同一种缓冲液梯度层析的方法，用不同的缓冲液组合，并优化配比、浓度、pH值等条件，最终完成本发明。

本发明的第一方面，提供一种人核糖体蛋白S5的表达提取纯化方法。

所述的人核糖体蛋白S5的表达提取纯化方法，包括以下步骤：

A、RPS5的原核表达及工程菌破碎

B、RPS5变性蛋白阳离子交换层析纯化

C、RPS5变性蛋白阴离子交换层析纯化

D、RPS5变性蛋白复性