[发明专利]检测GPCR之间相互作用及其交界面的方法

权利要求书

1.用于检测GPCR之间相互作用及交界面的方法，包括以下步骤：

(1)合成包含第一GPCR的一个或多个跨膜肽的融合蛋白，其中每个融合蛋白包含第一GPCR的一个跨膜肽和连接在所述跨膜肽的氨基酸或羧基端的膜结合肽，所述膜结合肽能与细胞膜上存在的分子连接从而促进跨膜肽在细胞膜上整合，且每个融合蛋白中膜结合肽与跨膜肽连接的顺序使得所述融合蛋白中包含的第一GPCR跨膜肽在细胞中能以与天然状态相同的方式与膜结合；

(2)在细胞中表达全长第二GPCR，并用步骤(1)中合成的每个融合蛋白分别孵育细胞，然后提取细胞中蛋白，并用全长第二GPCR的抗体对所提取的蛋白分别进行免疫沉淀；

(3)取免疫沉淀的蛋白混合物分别进行基质辅助激光解吸附串联飞行时间质谱分析，根据分子量的大小判断每个跨膜肽和全长第一GPCR之间是否发生相互作用以及相互作用的交界面。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(3)中，如果基质辅助激光解吸附串联飞行时间质谱分析检测结果中存在分子量等于特定跨膜肽和全长第一GPCR二者分子量之和的峰，则认为免疫沉淀的蛋白混合物中具有该特定跨膜肽和全长第一GPCR的二聚体，由此可以判断第一GPCR和第二GPCR相互作用的交界面在该特定跨膜肽上。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一GPCR与所述第二GPCR是相同的GPCR或不同的GPCR。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述膜结合肽是HIV TAT肽，其序列是YGRKKRRQRRR。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(1)中合成第一GPCR的部分跨膜肽或全部七个跨膜肽。