[发明专利]促进CIK细胞增殖分化的人参多糖、培养基、培养方法和应用

权利要求书

1.一种CIK细胞培养基，其特征在于，包括基础培养基、人参多糖精品、IFN-γ和CD3单抗；

所述基础培养基选自RPM1640培养基、DMEM培养基或MEM培养基；

所述人参多糖精品在CIK培养基中的含量为30μg/mL；

所述人参多糖精品是采用水提醇沉法从人参中提取得到的，制备方法包括如下步骤：

步骤1)取人参，加入10倍重量水，煎煮3次，第1次提取时间为2h，第2次1.5h，第3次1h，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至原体积的0.1-0.4倍；加入95％的乙醇使浓缩液含醇量为80％，4℃冷藏静置过夜，将冷藏后的药液用离心机低温离心20-40分钟，离心转速为4000转/分、收集沉淀，沉淀低温干燥得人参多糖粗品；

步骤2)人参多糖粗品加10倍重量水加热煮沸10-30分钟，降温，过滤，向滤液中加入95％的乙醇使含醇量为80％，4℃冷藏静置过夜，将冷藏后的药液用离心机在4℃下离心20-40分钟，离心转速为4000转/分，收集沉淀；

步骤3)重复水煮醇沉、冷藏离心过程2-3次，得到人参多糖沉淀；人参多糖沉淀加10倍重量水溶解，药液用冷冻离心机在-20℃冻实后，在4℃下融解离心20-30分钟，离心转速为4000转/分，取上清液，上清液重复冻融离心1次后，将上清减压，减压浓缩，在4℃下干燥得到人参多糖精品。

2.一种CIK细胞培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备CIK细胞的出发细胞；

(2)配制如权利要求1所述的CIK细胞培养基，并添加入步骤(1)中的出发细胞，37℃，5％CO₂培养箱内培养7d，定期更换1/2对应培养液，获得CIK细胞。

3.一种如权利要求1所述制备方法制得的人参多糖精品在促CIK细胞增殖分化中的应用。