[发明专利]促进CIK细胞增殖分化的人参多糖、培养基、培养方法和应用

说明书

本发明涉及一种能促进CIK细胞增殖分化的人参多糖、培养基、培养方法和应用。所述人参多糖是由人参制备而成。所述制备方法包括以下步骤：人参加水煎煮，过滤浓缩，冷藏静置，离心收集沉淀，干燥后重复水煮醇沉、冷藏离心，重复冻融离心后，减压浓缩干燥得到人参多糖。人参多糖提取液对CIK细胞有明显的诱导增殖作用，CD3和CD56双阳性明显提高且诱导培养后的CIK细胞对肿瘤生长有较强的杀伤作用，具有临床应用的潜力。

技术领域

本发明涉及中药应用技术领域，具体的说是涉及提取中药材中的有效成分，并在提高CIK细胞增殖速率、CD3和CD56双阳性和对肿瘤杀伤力的临床的应用。

背景技术

细胞过继免疫治疗是目前的研究热点，并已进入临床试验，它是将体外激活的自体或异体免疫效应细胞输注给患者，杀灭患者体内的肿瘤细胞，并在此基础上修复、完善机体免疫系统的生物治疗方法。CIK细胞(cytokine-induced-killer cells)是一群在体外经过多种细胞因子共同诱导，能够同时表达两种膜蛋白分子即CD3和CD56的异质细胞，它不仅具有自然杀伤细胞的非主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)限制性杀瘤特点，还具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，具有重要的免疫治疗临床应用价值。因此，CIK细胞的体外大量增殖，即提高其体外增殖速率和对肿瘤细胞的杀伤力，是大规模使用CIK 细胞免疫治疗的关键所在。多糖作为一种免疫调节和促进剂对巨噬细胞、T/B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)的功能都有调节作用，本发明应用人参多糖对CIK细胞的诱导和调节方面的研究有助于其更好地应用于临床。

发明内容

利用人参多糖提取液有机地结合CIK细胞免疫治疗在肿瘤治疗中的强大优势，建立人参多糖促进免疫细胞的大量增殖和提高杀伤力的工艺体系，从而间接改善肿瘤患者的生活质量，延长生存期。本发明目的在于提供最优人参多糖提取液浓度在提高CIK细胞增殖速率、CD3和CD56双阳性和对肿瘤杀伤力方面的应用。

本发明提供了一种促进CIK细胞增殖分化的人参多糖，所述人参多糖是采用水提醇沉法从人参中提取得到。

本发明提供了一种CIK细胞培养基，包括基础培养基和人参多糖。

进一步地，所述人参多糖在培养基中的含量为3～300μg/mL。优选的，所述人参多糖在培养基中的含量为30μg/mL。

进一步地，所述基础培养基选自RPM1640培养基、DMEM培养基或MEM 培养基。

进一步地，所述培养基中还包括IFN-γ和CD3单抗。

本发明提供了一种CIK细胞培养的方法，包括以下步骤：

(1)制备CIK细胞的出发细胞；

(2)配制含有人参多糖的培养基，并添加入步骤(1)中的出发细胞，经培养获得CIK细胞。

进一步地，所述人参多糖在培养基中的含量为3～300μg/mL。优选的，所述人参多糖在培养基中的含量为30μg/mL。

进一步地，所述培养基中还包括IFN-γ和CD3单抗。

进一步地，步骤(2)的方法包括37℃，5％CO₂培养箱内培养7d，定期更换1/2对应培养液。

本发明还提供人参多糖在促CIK细胞增殖分化中的应用。

本发明还提供了利用所述制备方法制得的CIK细胞在制备肿瘤治疗药物中的应用。

以上所述人参多糖采用经水提醇沉法从人参中提取得到。

更进一步的，本发明还提供了一种水提醇沉法提取人参多糖的方法，包括以下步骤：