[发明专利]二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸及其制备方法和应用

权利要求书

1.二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸，其特征在于，具有如下所示的结构：

2.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，制备路线如下：

(1)合成1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇2000-N-羟基丁二酰亚胺；

(2)合成1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基己二酸；

(3)合成端氨基叶酸；

(4)合成二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸；

3.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：

(1)合成1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇2000-N-羟基丁二酰亚胺

将280mg1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇2000溶于无水二氯甲烷8mL中，依次加入17.5mg N-羟基丁二酰亚胺和62mg二环已基碳二亚胺；混合物常温下避光反应3h；过滤除去生成的N,N-二氯氨基甲酸乙酯；滤液倒入预先冷却的乙醚200mL中，将乙醚混合物置于-20℃4h；过滤，干燥得到所需产物；

(2)合成1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基己二酸

将49mgL-2氨基己二酸溶于pH为8的0.1M硼酸缓冲液10mL中，然后加入300mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-N-羟基丁二酰亚胺，避光反应30min；将反应液用0.2N盐酸调节pH值为4-4.5，用氯仿萃取3次，每次80mL，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，然后倒入200mL预先冷却的乙醚中，在-20℃下搅拌4h，过滤，干燥得到所需产物；

(3)合成端氨基叶酸

将441mg叶酸溶于20mL无水二甲基亚砜中，依次加入428mgN-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺和572mg二环己基碳二亚胺，室温下反应4h；将反应液倒入300mL预先冷却的乙醚中，在-20℃搅拌4h，过滤，滤饼用四氢呋喃洗，干燥，得到叶酸-N-叔丁氧羰基，该产率高达90％；将654mg端氨基叶酸溶于无水二氯甲烷中，冰浴下加入50mL三氟乙酸；室温下反应2h；减压旋蒸蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸；将所得残留物倒入预先冷却的乙醚中，过滤，干燥得到所需产物；

(4)合成二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸

将300mg步骤(2)中合成的1,2-二硬酯酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基己二酸溶于5mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺中，55mg步骤(3)中合成的端氨基叶酸溶于1mL二甲基亚砜中，然后加入至体系中；常温避光反应过夜；然后加入8mL水，6mL 0.1N的盐酸和2mL饱和食盐水，用氯仿萃取4次，每次80mL；合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩；所得残留物倒入200mL预先冷却的乙醚中，-20℃下搅拌3h，过滤，干燥得到所需产物。

4.如权利要求1所述的化合物的应用，其特征在于，用于制备双叶酸靶向超声造影剂。

5.如权利要求4所述的化合物的应用，其特征在于，所述的双叶酸靶向超声造影剂的制备方法，步骤如下：

称取0.5mg司盘60，0.5ml吐温80置于1.5mLEP管中，加入1mg二棕榈酸磷脂酰胆碱，1mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸，PBS定容至1mL，通入全氟丙烷气体置换出空气，将离心管放置于恒温水浴锅中加热50min至脂质完全溶解，避光加入DiI染料，再次充入全氟丙烷气体置换其中的空气，机械振荡90s后取出，300rpm离心3min，取下层液体，即为所制备的双叶酸靶向超声造影剂。

6.一种双叶酸靶向超声造影剂，其特征在于，由权利要求1所述的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸制备而成。

7.如权利要求6所述的双叶酸靶向超声造影剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

称取0.5mg司盘60，0.5ml吐温80置于1.5mLEP管中，加入1mg二棕榈酸磷脂酰胆碱，1mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-双叶酸，PBS定容至1mL，通入全氟丙烷气体置换出空气，将离心管放置于恒温水浴锅中加热50min至脂质完全溶解，避光加入DiI染料，再次充入全氟丙烷气体置换其中的空气，机械振荡90s后取出，300rpm离心3min，取下层液体，即为所制备的双叶酸靶向超声造影剂。