[发明专利]一种红豆杉枝叶提取物及其制剂的HPLC分析方法

说明书

本发明公开了一种红豆杉枝叶提取物及其制剂的HPLC分析方法。首先，称取至少6个合格的红豆杉枝叶提取物样品或其制剂样品，分别与甲醇混合、过滤，得到各样品的供试品溶液，进行HPLC分析，得到各样品的HPLC指纹图谱，以此建立红豆杉枝叶提取物或其制剂的HPLC对照指纹图谱；然后，将待测样品与甲醇混合、过滤，得到待测样品的供试品溶液，然后进行HPLC分析，得到该待测样品的HPLC指纹图谱；将该指纹图谱与相应的HPLC对照指纹图谱进行比较，依据比较结果判断红豆杉枝叶提取物及其制剂质量的优劣。本发明能很好地控制红豆杉枝叶提取物及其制剂的质量。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域。更具体地，涉及一种红豆杉枝叶提取物及其制剂的HPLC分析方法。

背景技术

红豆杉枝叶为红豆杉科植物红豆杉的干燥叶，红豆杉枝叶主要含二环紫杉烷类、各种三环紫杉烷类、松香烷类和海松烷类二萜，以及木脂素类、黄酮类和酚类化合物等成分。红豆杉枝叶具有利尿消肿、温肾通经、抗肿瘤、抑制糖尿病等作用，因而可以作为药物来利用。

由于红豆杉枝叶具有上述的药效，因而在现有技术中，红豆杉枝叶的提取得到多方研究。红豆杉枝叶提取物是指经法定工艺制得的中间提取物，其工艺路线为：取干红豆杉枝叶，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.12～1.15（60℃），加乙醇至含醇量达85%，静置过夜，滤取上清液，备用沉淀物用65%乙醇洗涤两次，合并洗涤液，静置过夜，滤取上清液，与备用上清液合并，回收乙醇，加入适量的水，混匀，滤过，滤液用乙酸乙酷提取四次，合并乙酸乙酷液，回收乙酸乙酷并浓缩成稠膏，喷雾干燥，即得。

红豆杉枝叶提取物目前主要用于制备紫杉醇注射剂，由于不用产地、不同气候及提取工艺都会影响红豆杉枝叶提取物有效成分含量，从而影响红豆杉枝叶提取物的质量，而红豆杉枝叶提取物的质量又决定了紫杉醇注射剂的质量好坏，所以，需要对红豆杉枝叶提取物及其制剂的主要成分进行分析，考察红豆杉枝叶提取物及其制剂质量好坏及各批次产品之间的质量差异。在现有技术中，仅存在对不同产地红豆杉枝叶进行质量分析的方法，具体为：精密称取2 g样品粉末，室温下加20 mL体积分数95%乙醇浸泡24 h后超声处理2 h;4000r·min-1离心5 min，上清液过滤，沉淀分别用体积分数95%乙醇超声提取2次，每次30min，均经4000 r·min-1离心5 min，上清液过滤;合并3次滤液，置于旋转蒸发仪中蒸干;然后用V( 三氯甲烷)∶V ( 水) = 1∶1混合溶剂10 mL进行萃取，重复萃取3次，合并三氯甲烷相萃取液，用旋转蒸发仪于35 ℃蒸干；浸膏用甲醇溶解并定容至10 mL，用0.45 μm 微孔滤膜过滤，滤液即为供试样液。参照上述色谱条件进行HPLC分析，进样量5 μL。采用以下色谱条件进行洗脱：汉邦C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长227 nm；柱温为室温；流速0.8 mL·min-1；进样量5 μL。流动相为乙腈一水溶液，二元梯度洗脱，0～20 min，15%乙腈变化至50%，20～50 min，50%乙腈变化至100%，50～60 min，100%乙腈。

综上所述，目前对于红豆杉枝叶提取物的质量分析技术存在如下缺点：（1）主要是对不同产地的红豆杉枝叶药材进行指纹图谱分析，考察不同产地红豆杉枝叶的质量稳定性；而没有考虑不同气候及提取工艺等因素的影响。（2）上述现有技术所得的指纹图谱中含有12个特征色谱峰，只对其中的3个进行了指认，反映的信息量小。因此，到目前为止，仍无较好的方法来全面分析红豆杉枝叶提取物及其制剂中主要化学成分以及考察它们的质量稳定性。

发明内容