[发明专利]甲状腺癌易感基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测甲状腺癌易感基因突变的试剂盒，其特征在于，包含如下扩增引物组和测序引物：

1)扩增引物：

SEQ.ID NO.1：5'CAGCAGCCCACCTATAATAC 3'

SEQ.ID NO.2：5'GATCCAGGATGAGAGGGCTGAG 3'

SEQ.ID NO.3：5'TTAGTAAATTATCTCACAGGCA3'

SEQ.ID NO.4：5'TTAAACTAAGACAAACATTC 3'

2)测序引物：

SEQ.ID NO.5：5'GGACCTTAGA AGGTGACAGT 3'

SEQ.ID NO.6：5'ATGGTCTTTCTAGGCCACAG 3'。

2.根据权利要求1所述的检测甲状腺癌易感基因突变试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括DNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTPs、4条扩增引物、2条测序引物；所述4条扩增引物其序列如SEQ.ID NO.1-SEQ.ID NO.4所示，其中SEQ.ID NO.1和SEQ.ID NO.2、SEQ.ID NO.3和SEQ.IDNO.4分别用于XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因第13号外显子片段的扩增；所述2条测序引物其序列如SEQ.ID NO.5、SEQ.ID NO.6所示，其中SEQ.ID NO.5、SEQ.ID NO.6分别用于XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因第13号外显子片段的测序。

3.根据权利要求2所述的检测甲状腺癌易感基因突变的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶的酶活力单位浓度为5U/uL，具有耐热性能；所述PCR缓冲液是由pH＝8.2的100mmol/L Tris-HCl、500mmol/L KCl和10mmol/L MgCl2组成；所述dNTPs是由dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mmol/L混合而成的；所述扩增引物的浓度均为10umol/L。

4.一种利用权利要求2-3中任一项所述试剂盒的检测甲状腺癌易感基因突变的方法，其特征在于所述方法的步骤如下：

1)样本采集和基因组DNA提取：采集或取出待测生物样本，利用商品化的试剂盒提取其基因组DNA；

2)XRCC1、hMSH2基因特定片段扩增：采用所述试剂盒分别配制XRCC1、hMSH2基因外显子组合的扩增体系2管；每管扩增体系除了扩增引物不同外其余均相同，引物包括以下组合：第1管体系包含SEQ.ID NO.1-SEQ.ID NO.2扩增引物；第2管体系包含SEQ.ID NO.3-SEQ.IDNO.4扩增引物；对于25uL体系具体为2.5uL的10×PCR缓冲液，2uL的dNTPs，每条扩增引物1uL，0.2uLDNA聚合酶，20ng基因组DNA，最终添加灭菌去离子水补足至25uL；扩增条件均为：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min，循环35次；72℃终延伸10min；

3)目的基因片段的割胶回收：所有的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在1ug/ml的EB溶液中染色10min并用清水脱色后置于凝胶成像系统上拍照和分析，以DNA Marker条带为标准，选择正常体系中各外显子扩增产物浓度不低于10ng/uL的条带进行割胶，并用商品化的凝胶纯化试剂盒进行回收；

4)目的基因片段序列测定：对于割胶回收产物，按照DNA片段测序的标准操作进行测序和分析，依据所有测序峰图最终分析目的基因片段的序列；

5)突变结果判定和应用：通过对受检者基因序列的分析，出具甲状腺癌易感基因风险评估分析报告单。该试剂盒包括检测XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因13号外显子上的SNP位点信息以及遗传风险评估结果。除此之外，根据受检者的风险级别，并由医师向受检者详细说明和解读甲状腺癌易感基因检测报告单。