[发明专利]多不饱和脂肪酸体外扩增髓系来源的抑制性细胞的方法在审
| 申请号： | 201611108030.X | 申请日： | 2016-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN108148801A | 公开（公告）日： | 2018-06-12 |
| 发明（设计）人： | 鄢德洪;万晓春 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 韩蕾;姚亮 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抑制性 髓系 多不饱和脂肪酸 培养液 细胞 骨髓细胞悬液 骨髓细胞 体外扩增 裂解 巨噬细胞集落刺激因子 红细胞裂解液 细胞悬液 细胞治疗 肿瘤来源 粒细胞 免疫性 股骨 可用 胫骨 冲洗 骨髓 疾病 安全 | ||
1.一种多不饱和脂肪酸体外扩增髓系来源的抑制性细胞的方法，该方法包括步骤：
(1)取动物股骨和胫骨，用培养液冲洗骨髓，获得骨髓细胞悬液；
(2)向上述骨髓细胞悬液中加入红细胞裂解液进行裂解处理；
(3)裂解处理后的细胞悬液进行离心，得到骨髓细胞；
(4)将骨髓细胞于加入多不饱和脂肪酸与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的培养液中培养，获得髓系来源的抑制性细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述动物为小鼠。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中所述培养液为RPMI 1640培养液。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中所述红细胞裂解液的组成如下：
每升红细胞裂解液中，氯化铵8～8.6克，碳酸氢钾1～1.2克，乙二胺四乙酸钠30～50毫克，加水至总体积1升，并调酸碱度至7.2～7.4；
优选地，红细胞裂解液的用量为：每1×107个骨髓细胞加入红细胞裂解液0.3～1毫升。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中裂解处理条件为10～15分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中离心条件为2500～4000转/分钟离心5～10分钟。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中所述多不饱和脂肪酸为亚麻酸或亚油酸。
8.根据权利要求1或7所述的方法，其中，步骤(4)的培养体系中所述多不饱和脂肪酸的浓度为50～200微摩尔/升；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的浓度为10～30纳克/毫升。
9.根据权利要求1或7所述的方法，其中，步骤(4)的培养体系中还加入有β-巯基乙醇，β-巯基乙醇在培养体系中的浓度为30～80微摩尔/升。
10.根据权利要求1或7所述的方法，其中，步骤(4)中的培养条件为：培养液为含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基，培养于37℃、5％CO2培养箱中，隔一天换培养液一次，培养至第5～7天，收集细胞。
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