[发明专利]一种生物法制备苯乙酸的方法有效
| 申请号： | 201611110169.8 | 申请日： | 2016-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN106701842B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 魏东芝;许向阳;宋在伟;王华磊 | 申请（专利权）人： | 枣庄市杰诺生物酶有限公司;华东理工大学 |
| 主分类号： | C12P7/40 | 分类号： | C12P7/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 吴林松;孔翰 |
| 地址： | 277100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物 法制 苯乙酸 方法 | ||
1.一种生物法制备苯乙酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：
将苯乙腈分批次加入转化液中，在转化pH为6.0-9.0和转化温度为20-40℃的条件下反应5-20个批次，待上一批次的苯乙腈的转化率达到70％-100％后加入下一批次，待最后批次的苯乙腈的转化率达到70％-100％后终止反应，得到苯乙酸；
所述的转化液含有用于分泌MG腈水解酶的E.coli工程菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述批次的数目为7-15；和/或，
待上一批次的苯乙腈的转化率达到80％-95％后加入下一批次。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的转化液的制备方法包括如下步骤：
(1)、将所述的E.coli工程菌在发酵培养基中进行扩增培养，离心以得到静息细胞；
(2)、收集所述的静息细胞，并将其悬浮在pH为6.0-9.0的缓冲液中，得到所述的转化液；每批次所加入的苯乙腈的量相等，为0.1-20mL/g静息细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的发酵培养基的组分及含量如下：酵母膏16-60gL-1、蛋白胨12-80gL-1、甘油1-500mlL-1、K2HPO4 24.75gL-1、KH2PO43.47gL-1、MgSO4 1gL-1。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中的转化液中，所述的静息细胞的浓度为10-100gL-1。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中的缓冲液为NaH2PO4/Na2HPO4缓冲液、KH2PO4/K2HPO4缓冲液中和Tris-HCl缓冲液的任意一种；或者，
步骤(2)中还添加了苯乙腈的助溶剂，所述的助溶剂为体积分数为1％-25％的甲醇、乙醇、异丙醇和正己烷中的任意一种或几种。
7.根据权利要求1至2中任一所述的方法，其特征在于：转化pH为7-9。
8.根据权利要求1至2中任一所述的方法，其特征在于：转化温度为25-37℃。
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