[发明专利]用于预防宫腔粘连及子宫内膜损伤修复的细胞制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于妇产科学领域，其涉及用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂及其制备方法。

背景技术

宫腔粘连(intrauterine adhesions，IUA)又称Asherman综合征，是指由创伤、感染等因素造成的子宫内膜基底层细胞的损伤导致子宫腔内粘连组织形成，引起宫腔变形甚至宫腔完全消失，使患者出现月经异常(闭经或月经量减少等)、不孕、流产、早产及周期性腹痛等异常情况。近年来由于频繁的宫腔操作及宫腔镜手术的普及，子宫粘连的发病率和检出率逐渐上升，而且发病年龄呈年轻化趋势，已成为女性继发不孕的第二大病因。尽管临床医生不断寻求新的治疗方案，子宫粘连的治愈率和妊娠率仍无明显改善，且复发率较高(轻度IUA患者治疗后复发率为33.3％，重度IUA患者治疗后复发率更是高达66.7％)，由此引起的不孕以及反复流产、早产、前置胎盘、胎盘粘连或植入等产科并发症严重威胁着女性的生殖健康。目前临床上针对IUA的治疗主要是采用宫腔镜下宫腔粘连分离术、术后放置宫内节育器或防粘连材料(主要为透明质酸钠凝胶)以及术后应用雌孕激素治疗，但是以上方法存在着治疗周期长、治愈率低下、粘连易复发、妊娠率低、大剂量雌激素应用会增加患者乳腺和子宫内膜肿瘤风险等问题。此外，对于严重的子宫内膜损伤，该治疗方法并不能解决内膜疤痕问题，且无法实现子宫内膜功能性修复及生育功能的恢复。研究报道采用人羊膜植入治疗IUA可促进子宫内膜生长，抑制纤维化瘢痕的形成，可同样对于重度子宫内膜损伤患者来说，该方法也无法实现子宫内膜功能性修复。子宫腔灌注粒细胞集落刺激因子可使部分内膜薄患者内膜厚度增加，但该方法存在作用时间短，局部疗效差，且无法促进疤痕内膜生长等缺陷。骨髓间充质干细胞治疗宫腔粘连，可以促进子宫内膜组织再生，实现子宫内膜功能性修复，但是单一应用骨髓间充质干细胞存在难于局部定位以及修复不稳定、不彻底等问题。胶原支架复合骨髓或脐带间充质干细胞可以治疗严重子宫内膜损伤，促进疤痕子宫内膜修复，恢复患者生育功能，但是此法也存在的一定的局限性，比如细胞制剂制备方法复杂，细胞获取不方便，细胞获取或细胞制剂应用时对患者造成的痛苦大及创伤大等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中细胞获取不便、对患者造成的痛苦大、创伤大及采用单一干细胞存在难于局部定位、修复不稳定、不彻底以及传统宫腔粘连及子宫内膜损伤修复方法无法实现严重子宫内膜再生修复、子宫内膜功能性恢复或作用时间短，局部疗效差等问题，提供一种能够高效预防宫腔粘连及修复严重子宫内膜损伤的混合干细胞制剂及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于预防宫腔粘连及修复子宫内膜损伤的细胞制剂，所述的细胞制剂由间充质干细胞、人重组基质细胞衍生因子-1α(rhSDF-1α)和用于承载间充质干细胞及rhSDF-1α的透明质酸钠凝胶组成，所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞或胎盘间充质干细胞。

所述的间充质干细胞的来源为人脐带或胎盘；

所述的细胞制剂中，间充质干细胞的浓度为5×10⁶～2×10⁸个/mL；

所述的间充质干细胞为原代-第10代的间充质干细胞；优选地，所述的间充质干细胞为原代-第3代的间充质干细胞。

所述的细胞制剂中，rhSDF-1α的质量浓度为10-150ng/mL；

所述的细胞制剂中，透明质酸钠凝胶的质量浓度为10-100mg/mL；

所述的透明质酸钠凝胶的分子量为400000-1000000；

所述的透明质酸钠凝胶为医用透明质酸钠凝胶。

所述的细胞制剂为混悬液。

所述的细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备脐带或胎盘间充质干细胞；

2)将所述脐带或胎盘间充质干细胞与rhSDF-1α和透明质酸钠凝胶按比例混合，制得。

所述的脐带间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：

1)取志愿、健康合格孕妇的足月剖宫产的新生儿脐带，充分洗涤去除脐动静脉中的血管；

2)将脐带组织剪成块状，加入胶原酶消化液，37℃恒温摇床中振荡消化，完全培养基(DMEM)和10％胎牛血清(FBS)终止消化；

3)50目筛网过滤人脐带组织消化后的产物；

4)将收集的过滤液离心、分离获得单个核细胞；