[发明专利]一种ZNF667蛋白的RNA干扰质粒及其应用方法

权利要求书

1.一种 ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，用于制备抑制肝癌的制剂，所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒是根据 ZNF667的序列设计能够产生干扰 ZNF667蛋白表达的siRNA的DNA片段，插入到短发夹RNA干扰载体中构建而成。

2.根据权利要求1所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，

以人 ZNF667的mRNA序列为模板，以及载体启动子启动表达siRNA对序列的要求，设计合成能够产生干扰ZNF667蛋白表达的siRNA的DNA片段。

3.根据权利要求2所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，siRNA干扰的目标基因ZNF667序列如下：

siRNA-1：CGAATATCTCTCACACGACAT；

siRNA-2：CGCCAATCATTTCTTATTGAA；

siRNA-3：CAACCCTTATTCTGCATCTAA。

4.根据权利要求3所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，

siRNA干扰的目标基因ZNF667序列为siRNA-2：CGCCAATCATTTCTTATTGAA。

5.根据权利要求3所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，

选用的原始质粒表达载体优选为pRNAT-U6.1/Neo。

6.根据权利要求5所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，DNA片段插入到载体时的酶切位点为BamH I和Hind III。

7.根据权利要求6所述的ZNF667蛋白的短发夹RNA干扰质粒的应用方法，其特征在于，根据ZNF667的序列设计能够产生干扰ZNF667蛋白表达的siRNA的DNA片段，具体序列如下：

ZNF667-shRNA-1 a链序列：

5’-

GATCCCCGAATATCTCTCACACGACATCTCGAGATGTCGTGTGAGAGATATTCGTTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA-1 b链序列：

5’-

AGCTATCCAAAAACGAATATCTCTCACACGACATCTCGAGATGTCGTGTGAGAGATATTCG GG -3’

ZNF667-shRNA-2 a链序列：

5’-

GATCCCCGCCAATCATTTCTTATTGAACTCGAGTTCAATAAGAAATGATTGGCG TTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA-2 b链序列：

5’-

AGCTATCCAAAAAGCCAATCATTTCTTATTGAACTCGAGTTCAATAAGAAATGATTGGCG GG -3’

ZNF667-shRNA -3a链序列:

5’-

GATCCCCAACCCTTATTCTGCATCTAACTCGAGTTAGATGCAGAATAAGGGTTG TTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA -3b链序列:

5’-

AGCTATCCAAAAACAACCCTTATTCTGCATCTAACTCGAGTTAGATGCAGAATAAGGGTTGGG-3’。