[发明专利]SPOP及突变体表达的C4-2稳定细胞系及构建方法在审
申请号: | 201611133369.5 | 申请日: | 2016-12-10 |
公开(公告)号: | CN108220242A | 公开(公告)日: | 2018-06-29 |
发明(设计)人: | 朴海龙;颜敏 | 申请(专利权)人: | 中国科学院大连化学物理研究所 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/66 |
代理公司: | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人: | 马驰 |
地址: | 116023 *** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 突变体 前列腺癌 酶切反应 高表达 慢病毒 野生型 构建 生物医学研究 稳定细胞系 细胞培养液 代谢紊乱 突变体表 引物合成 测序 质粒 突变 筛选 验证 细胞 基因 研究 感染 成功 | ||
本发明涉及生物医学研究领域,建立了SPOP及其突变体高表达的前列腺癌C4‑2细胞系。通过引物合成,PCR反应,酶切反应,将SPOP野生型及其突变体1和突变体2基因分别成功连接到了Ploc.rfp载体上。通过酶切反应和测序验证了质粒的正确性。接下来,我们通过在HEK293T细胞中构建慢病毒的方法,收集含有慢病毒的细胞培养液,用于前列腺癌C4‑2细胞的感染。经过12‑16天8‑12μg/mL的blasticidin筛选,得到SPOP野生型及其突变体1和突变体2高表达的C4‑2细胞系。本专利为研究前列腺癌SPOP突变所造成的代谢紊乱提供了研究体系。
技术领域
本发明涉及生物医学领域,具体涉及一种构建SPOP野生型及其突变体表达的C4-2稳定细胞系及其构建方法。
背景技术
SPOP是目前已知的前列腺癌突变率最高的基因。SPOP蛋白分子量大小为42kDa。在约6-15%的前列腺癌病人中都存在突变1。SPOP蛋白是一种E3泛素化连接酶,可以介导一些蛋白的泛素化降解。在前列腺癌中,SPOP突变位点主要集中在底物结合MATH域,其突变会导致原本通过与其结合泛素化降解的蛋白不再能够被泛素化降解,从而导致癌蛋白在细胞内累计。目前已经报道的SPOP底物有AR2、ERG3,4、PTEN5、DEK6等。研究发现,在前列腺癌中,敲除SPOP基因会导致前列腺癌细胞侵袭性增加。
前列腺癌是发病率最高的男性癌症。目前为止,对其机理研究的还不是很透彻,SPOP突变到底会在前列腺癌中引起怎样的变化,目前的认识还是比较少的。我们在前列腺癌细胞C4-2中构建的SPOP及其突变体高表达细胞系有助于研究SPOP突变对前列腺癌发生发展所产生的影响。
参考文献
1 Barbieri,C.E.et al.Exome sequencing identifies recurrent SPOP,FOXA1and MED12mutations in prostate cancer.Nat Genet44,685-689,doi:10.1038/ng.2279(2012).
2 An,J.,Wang,C.,Deng,Y.,Yu,L.&Huang,H.Destruction of full-lengthandrogen receptor by wild-type SPOP,but notprostate-cancer-associatedmutants.Cell reports6,657-669,doi:10.1016/j.celrep.2014.01.013(2014).
3 An,J.et al.Truncated ERG Oncoproteins from TMPRSS2-ERG Fusions AreResistant to SPOP-Mediated Proteasome Degradation.Molecular cell59,904-916,doi:10.1016/j.molcel.2015.07.025(2015).
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5 Li,G.et al.SPOP promotes tumorigenesis by acting as a keyregulatory hub in kidney cancer.Cancer Cell25,455-468,doi:10.1016/j.ccr.2014.02.007(2014).
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