[发明专利]岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用

说明书

岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用。本发明公开了一种通式(I)的岩白菜素的偶联物，由岩白菜素与产生免疫原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白(KLH)偶联构成，其中n为与一个钥匙孔蓝蛋白分子结合的岩白菜素的分子数，KLH为钥匙孔蓝蛋白，分子量范围是450KDa～13000KDa。本发明还公开了所述的偶联物的制备方法，即将岩白菜素与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物。本发明的岩白菜素的偶联物通过免疫新西兰大白兔，制备了效价达到1∶16000的抗血清，其最低检测限为16.03ng/ml。本发明具有简便，快捷，特异，准确的特点，为制备岩白菜素的酶联免疫检测试剂盒提供了基础。

技术领域

本发明涉及一种小分子半抗原的偶联物及其制备方法与应用，尤其涉及岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用。

背景技术

本发明涉及的下列名称适用于整个说明书和权利要求书：

岩白菜素：中国标准品质检所产品

KLH：钥匙孔蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)，Sigma公司产品

CDI：N，N′-羰基二咪唑，Sigma公司产品

DMAP：4-二甲氨基吡啶，Sigma公司产品

DMF：二甲基甲酰胺，北京百灵威(JK)公司产品

透析袋：北京索莱宝(Solarbio)公司产品

PBS：磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Saline)(0.01M，pH＝7.40)。

岩白菜素(Bergenin)又称岩白菜内酯、矮茶素、佛手配质，为虎耳草科植物岩白菜、岩陀、鬼灯檠、落新妇、百两金、矮地茶等草药的有效成分。岩白菜最早载于清《分类草药性》，中医和临床广泛用于治疗咳嗽、吐血、便血、肠炎、白带、肿毒等，外用治疗疮毒、疥癣。岩白菜素有中等强度的止咳作用，其初提物对“咳、痰、喘、炎”四症作用明显，治疗气管炎有独到之处。目前岩白菜素已有多种制剂作为镇咳祛痰药用于临床治疗慢性支气管炎，其生理活性显著。因此，以岩白菜素为指标性成分对地道药材进行相关质量检测和鉴定分析有着重要的意义。

岩白菜素常用的测定方法有紫外分光光度法、比色法和薄层扫描法等，这些定量分析方法操作繁杂，专属性不强，准确度不高。目前，对岩白菜素的含量测定研究大多是采用高效液相色谱法，该方法准确，稳定，可靠，但是由于仪器法价格昂贵，费事较长，且造成有机溶剂污染，需要大型仪器设备，需要专门的技术人员，所以难于应用于现场操作。酶联免疫检测法(ELISA)提供了一种极好的检测手段，该方法具有快速，准确，简易，不需要专人操作等优点，这使得ELISA法成为一种理想的检测手段。酶联免疫检测法的核心是需要高质量的抗体。岩白菜素是一种小分子有机化合物，不具有免疫原性，称之半抗原。所以，必须把岩白菜素转化为能引发动物免疫系统产生抗体的免疫原(又称之为完全抗原)。经检索，世界上尚未有关于岩白菜素的免疫原合成及抗体制备过程的报道，不能满足检测需要，因此研究岩白菜素的免疫原的合成显得格外重要。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明要解决的问题是：提供一种能引发动物免疫系统产生针对岩白菜素有特异反应的抗体的免疫原，即岩白菜素的偶联物及其制备方法。同时，本发明还提供了所述的岩白菜素的偶联物作为免疫原在制备岩白菜素特异反应抗体中的应用。

本发明的岩白菜素的偶联物，由岩白菜素半抗原与产生免疫原性的载体物质偶联而成，所述载体物质为优选蛋白质，蛋白片段，合成多肽或半合成多肽。

上述的岩白菜素的偶联物，其中所述产生免疫原性的载体物质是钥匙孔蓝蛋白。

本发明所述的岩白菜素的偶联物，其结构通式如(I)