[发明专利]芦荟苷的偶联物及其制备方法与应用

说明书

芦荟苷的偶联物及其制备方法与应用。本发明公开了一种通式(1)的芦荟苷的偶联物，由芦荟苷与产生免疫原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白(KLH)偶联构成，其中n为与一个钥匙孔蓝蛋白分子结合的芦荟苷的分子数，KLH为钥匙孔蓝蛋白，分子量范围是450KDa～13000KDa。本发明还公开了所述的偶联物的制备方法，即将芦荟苷与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物。本发明的芦荟苷的偶联物通过免疫新西兰大白兔，制备了效价达到1∶16000的抗血清，其最低检测限为57.18ng/ml。本发明具有简便，快捷，特异，准确的特点，为制备芦荟苷的酶联免疫检测试剂盒提供了基础。

技术领域

本发明涉及一种小分子半抗原的偶联物及其制备方法与应用，尤其涉及芦荟苷的偶联物及其制备方法与应用。

背景技术

本发明涉及的下列名称适用于整个说明书和权利要求书：

芦荟苷：中国标准品质检所产品

KLH：钥匙孔蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)，Sigma公司产品

冰醋酸：天津光复精细化工研究所产品

高碘酸钠：北京百灵威(J&K)公司产品

透析袋：北京索莱宝(Solarbio)公司产品

PBS：磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Saline)(0.01M，pH＝7.40)

CBS：碳酸盐缓冲溶液(Carbonate Buffer Saline)(0.05M，pH＝9.6)。

芦荟苷(Aloin)，又称芦荟甙、芦荟素，是芦荟的主要活性成分之一。芦荟苷主要存在于芦荟叶皮内表面，是芦荟诸多功能的重要活性物质，具有健胃、通便利尿、养颜排毒、杀菌、抑制肿瘤等作用。芦荟及其制品在医药、美容、保健、食品等领域有广泛研究应用，芦荟产业已形成一个欣欣向荣的产业呈现在世人面前。

现今国家已正式将芦荟列入保健食品原料可利用的中药名单中，芦荟原料的安全评价列为食品安全专项研究课题中。芦荟安全食用量，取决于其制品中芦荟苷的含量。然而，芦荟品种、叶龄、采收时间、加工方式的不同，导致其制品中芦荟苷含量亦不同。一般情况下，药典芦荟干制品中芦荟苷含量为15％～25％左右，植物全叶及叶皮粉中为0.3％～1％左右，芦荟原汁中为0.005％。我国药典推荐中药芦荟干制品日服用量为2～5克，即芦荟苷含量为300～1250mg，美国草药协会植物药材安全手册推荐芦荟苷每日服用量为10～30mg，不超过10天，并提示芦荟苷1000mg服用超过1～2天，可导致结肠穿孔，血性腹泻及肾炎。因此，以芦荟苷为指标性成分对芦荟及其制品进行相关质量检测和鉴定分析有着重要的意义。

目前，芦荟苷常用的测定方法有高效液相法、质谱法、毛细管电泳法和荧光分光光度法等，这些定量分析方法操作繁杂，专属性不强，仪器价格昂贵，费事较长，且造成有机溶剂污染，需要专门的技术人员，所以难于应用于现场操作。酶联免疫检测法(ELISA)提供了一种极好的检测手段。该方法具有快速，准确，简易，不需要专人操作等优点，这使得ELISA法成为一种理想的检测手段。酶联免疫检测法的核心是需要高质量的抗体。芦荟苷是一种小分子有机化合物，不具有免疫原性，称之半抗原。所以，必须把芦荟苷转化为能引发动物免疫系统产生抗体的免疫原(又称之为完全抗原)。经检索，世界上尚未有关于芦荟苷的免疫原合成及抗体制备过程的报道，不能满足检测需要，因此研究芦荟苷的免疫原的合成显得格外重要。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明要解决的问题是：提供一种能引发动物免疫系统产生针对芦荟苷有特异反应的抗体的免疫原，即芦荟苷的偶联物及其制备方法。同时，本发明还提供了所述的芦荟苷的偶联物作为免疫原在制备芦荟苷特异反应抗体中的应用。