[发明专利]一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法

说明书

本发明公开了一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法，将古代牛毛微痕迹土样及表土层土样，生土层土样提取分离，通过采用二维电泳技术将蛋白质进行有效的分离同时比较三种样品的电泳结果，排除土壤中可能含有蛋白质的影响以及外界因素的干扰,将电泳结果中的条带割下来完成胶内酶切，然后进行质谱分析，根据质谱分析结果与蛋白质数据库中的氨基酸序列进行比较，即可实现蛋白质的鉴定。本发明采用蛋白质组学方法测定古代牛毛微痕迹，解决了普通分析测试在分析微痕迹残留物时束手无策的问题，通过蛋白质组学测定，准确的得到样品中的蛋白种类，判断微痕迹样品是否为牛毛微痕迹，一方面灵敏度高，操作简便，另一方面准确度高，样品使用量少。

技术领域

本发明涉及一种测定古代牛毛微痕迹的方法，更具体的说是涉及一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法。

背景技术

牛毛是一种天然动物毛纤维，具有角质组织，坚韧并有弹性，可用于生产各种毛织品，是主要的毛纺工业原料。

中国历史悠久，从中国早期的墓葬中出土有大量的牛毛制品，这些牛毛及牛毛制品的主要成分是蛋白质，长期埋藏在地下环境中，受到湿、热和微生物等因素的影响，纤维会发生不同程度的降解；出土后因环境条件的剧烈变化，进一步加速了纤维的老化，因此，在漫长的历史进程中，当年埋入墓葬或遗址中的一些牛毛及其制品早已失去了实体面貌，降解成肽段和氨基酸，或者成为痕迹，或者化入泥土，在肉眼下已经无法辨识，且年代越早的证据越难寻觅，给牛毛类文物的鉴定和保护研究带来了很大的困难。

目前，普通的分析检测技术，如傅里叶红外光谱，拉曼光谱，X-衍射分析等，在遇到这种微痕迹类残留物分析时，往往束手无策，国内外对于牛毛微痕迹的鉴定，大多数还停留在对纤维形态的分析上，所得出的鉴定结果也没有十足的准确性；因此，寻找一种更为科学的手段来鉴定牛毛微痕迹是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种操作简单，结果准确的一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法，该方法采用如下步骤：

(A)称取古代牛毛微痕迹土样，表土层土样和土层土样各25～30g,用研钵分别研磨三组样品，标记为A、B、C三组；

(B)配制质量分数为5～7％的过一硫酸氢钾复合盐水溶液3000～5400ml，用饱和氢氧化钠对该溶液进行调节，以使溶液的pH为4～6，等量分为三组备用；

(C)将步骤(A)中的三组样品均按照1:40～60的浴比分别放入步骤(B)配好的溶液中，然后在30～50℃下搅拌40～50min，三组实验在相同条件下独立操作；

(D)对经步骤(C)最终得到的三组样品使用高速冷冻离心机进行离心除去悬浮颗粒，转速控制在4000～5000r/min,温度为10～30℃，时间为25～30min；

(E)将质量分数为4～6％的亚硫酸氢钠、质量分数为2～5％的尿素以及质量分数为0.5～1.5％的十二烷基苯磺酸钠进行混合以形成每组样品50～100倍质量的混合溶液；

(F)将步骤(E)中形成的混合溶液分别加入步骤(D)中离心完成后的三组样品中，并在90～110℃下反应3～5h后完成过滤；

(G)对经步骤(F)后的三组样品使用截留分子量为8000～14000的透析袋透析，透析开始后的前10～12h，每隔1.5～2.5h换一次水，10～12h后每隔6～8h换一次水，70～72h后将得到的液体装入浓缩管中真空浓缩15～20min备用；