[发明专利]辅酶混合溶液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种辅酶混合溶液，所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。本发明所具有的优点是：能够较好促进酶化学反应。本发明还公开了一种辅酶混合溶液的制备方法。

技术领域

本发明涉及添加剂技术领域，尤其是涉及一种辅酶混合溶液。本发明还涉及一种辅酶混合溶液的制备方法。

背景技术

ATP是细胞重要的供能物质和辅酶，而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD，也称辅酶Ⅰ或线粒体素，是细胞内糖酵解途径和细胞呼吸的重要细胞因子。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP也称辅酶Ⅱ，是合成核酸和脂肪酸的重要细胞因子。随着绿色酶化学工程的发展，利用生物酶在体外实现重要化合物的合成成为现实，大部分酶反应均需要辅酶的供能或质子转移、磷酸根转移。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅酶混合溶液，它具有能够较好促进酶化学反应的特点。本发明还公开了一种辅酶混合溶液的制备方法。

本发明所采用的第一个技术方案是：

辅酶混合溶液，所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。

本发明所采用的第二个技术方案是：

辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：

（1）取含水量不高于50%的酿酒酵母，超声波破碎30—120min得到破碎酵母；

（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5—2.5%的重量添加腺苷，之后加热到35—40°C形成混合料；

（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5—7.0，加热到35—40°C后，得到第一混合液，其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.15—0.25%、1.5—2.5%、4—6%，水的重量为破碎酵母重量的1—2倍；

（4）继续搅拌第一混合液30—60min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应30—60min得到第二混合液，其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的5—15%；

（5）静置第二混合液20—40min，然后向第二混合液中添加纯度不低于20%的NAD激酶继续反应25—35min得到第三混合液，其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.005—0.015%；

（6）静置第三混合液至少30min，然后用磷酸调PH为2.5—3.5得第四混合液；

（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩15—25倍，即得辅酶混合溶液。

本发明所具有的优点是：能够较好促进酶化学反应。本发明的辅酶混合溶液的化学成分较为合理，对酶化学反应具有较好的促进作用。本发明的辅酶混合溶液的制备方法利用酿酒酵母酶系添加基因工程NADH激酶作为工程酶系，添加原辅料转化生产三磷酸腺苷ATP的同时，联产含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP，确保得到成分合理的辅酶混合溶液。

具体实施方式

实施例1

辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：