[发明专利]一种抗人乙肝病毒药物的筛选方法在审
| 申请号： | 201611138490.7 | 申请日： | 2016-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN108611395A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 张辉;何欣 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/18 | 分类号： | C12Q1/18;G01N21/64;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 单香杰 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光蛋白 人乙肝病毒 肽段 融合蛋白 受体细胞 阴性对照 药物处理 荧光信号 构建 检测 筛选 高通量筛选 抗病毒药物 读出操作 信号监测 药物筛选 共转化 全序列 转化 组装 克隆 细胞 观察 研究 | ||
1.一种抗人乙肝病毒药物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：将SEQ ID NO：1所示的HBc分别与荧光蛋白的肽段a和肽段b相连，构建得融合蛋白A和B，所述肽段a和肽段b连接共同组成荧光蛋白的全序列；将融合蛋白A和B通过克隆技术共转化同一受体细胞，用待检测药物处理上述转化的受体细胞，同时以未用药物处理的上述转化的受体细胞作为阴性对照；观察细胞中荧光蛋白的信号，如果无荧光蛋白信号或荧光信号低于阴性对照，说明待检测药物可以抗人乙肝病毒，如果荧光信号与阴性对照信号强度相当，说明待检测药物不可以抗人乙肝病毒。
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在在于，所述荧光蛋白为黄色荧光蛋白、蓝绿色荧光蛋白或Venus荧光蛋白。
3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在在于，所述肽段a的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；或，肽段a的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；或，肽段a的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；或，肽段a的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；或，肽段a的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示；或，肽段a的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示，肽段b的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示。
4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在在于，SEQ ID NO：1所示的HBc分别与荧光蛋白的肽段a和肽段b相连时，使用linker序列连接，所述Linker序列为(GGSG)n；(GGSGG)n；(GSGSG)n；(GSGGG)n；(GGGGS)n；(GGGSG)n；(GSSSG)n；RPACKIPNDLKQKVMNH；RSIAT。
5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在在于，所述受体细胞为HEK293T细胞、HepG2或Huh7。
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