[发明专利]一种植物组织的显微观察方法有效

申请号：	201611138800.5	申请日：	2016-12-12
公开（公告）号：	CN106769298B	公开（公告）日：	2019-04-16
发明（设计）人：	田世平;陈彤;秦国政;徐勇	申请（专利权）人：	中国科学院植物研究所
主分类号：	G01N1/28	分类号：	G01N1/28
代理公司：	北京纪凯知识产权代理有限公司 11245	代理人：	关畅;白艳
地址：	100093 北京市海淀***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	显微观察深层组织荧光染色种植物基因表达模式荧光显微镜标记操作表型鉴定高等植物氢氧化钾透明处理透明技术透明效果消化处理植物组织兼容性再使用酶解观测消化研究清晰观察应用
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【权利要求书】：

1.一种植物组织显微镜检测前处理的方法，包括如下步骤A：

1）将植物组织用固定液固定，得到固定后的植物组织；

2）将所述固定后的植物组织用氢氧化钾消化，得到消化后的植物组织；

3）将消化后的植物组织用PHEM溶液洗涤，得到洗涤后植物组织；

4）将所述洗涤后植物组织在透明液中浸没处理，得到透明后的植物组织，实现植物组织显微镜检测前处理；

所述PHEM溶液包括PIPES、HEPES、EGTA和MgCl_2；

所述透明液由尿素、丙三醇、Triton X-100和所述PHEM溶液组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为40-80：15-35：5-15：1-3；

所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为4-8mol：20-40ml：0.05-0.15g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为60：25：15：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为60：25：10：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为40：15：5：1；

所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为6mol：20ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为6mol：30ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为4mol：20ml：0.1g。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

所述PHEM溶液由终浓度为40-80 mM PIPES、终浓度为15-35 mM HEPES、终浓度为5-15mM EGTA、终浓度为1-3 mM MgCl₂和水组成；所述透明液由终浓度为4-8 M尿素、体积百分比20-40%丙三醇、质量百分含量0.05-0.15% Triton X-100和PHEM溶液组成。

5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述PHEM溶液由终浓度为60 mMPIPES、终浓度为25 mM HEPES、终浓度为15mM EGTA、终浓度为2mM MgCl₂和水组成；

或所述PHEM溶液由终浓度为60 mM PIPES、终浓度为25 mM HEPES、终浓度为10 mMEGTA、终浓度为2 mM MgCl₂和水组成；

或所述PHEM溶液由终浓度为40 mM PIPES、终浓度为15 mM HEPES、终浓度为5 mMEGTA、终浓度为1 mM MgCl₂和水组成；

所述透明液由终浓度为6 M尿素、体积百分比20%丙三醇、体积百分比0.1% Triton X-100和PHEM溶液组成；

或所述透明液由终浓度为6M尿素、体积百分比30%丙三醇、体积百分比0.1% Triton X-100和PHEM溶液组成；

或所述透明液由终浓度为4 M尿素、体积百分比20%丙三醇、体积百分比0.1% TritonX-100和PHEM溶液组成。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述PHEM溶液的pH值为6.9。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述将固定后的植物组织用氢氧化钾消化的方式为将固定后的植物组织浸在浓度为质量百分比10-15%的氢氧化钾水溶液中；

所述将消化后的植物组织用PHEM溶液洗涤的方式为将所述消化后的植物组织浸没在所述PHEM溶液中。

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