[发明专利]一种植物组织的显微观察方法

说明书

本发明公开了一种植物组织的显微观察方法。本发明提供的植物组织的显微观察方法，将固定处理后再使用氢氧化钾进行消化，再进行透明处理，避免了酶解或其它操作，节省了成本；透明效果好，与荧光染色和标记操作兼容性好：可通过荧光染色在荧光显微镜下清晰地观测到植物深层组织的内部结构。消化处理结合透明技术对植物深层组织进行显微观察的方法为高等植物表型鉴定以及基因表达模式的深入研究奠定了基础，尤其在植物深层组织结构进行观察的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种植物组织的显微观察方法。

背景技术

随着功能基因组学、分子生物学研究的不断深入，特定基因在植物体内的表达部位其在特定发育时期的功能得到了广泛关注。荧光显微观察和三维成像技术为植物表型分析、植物与病原菌互作以及基因表达模式分析提供了重要工具。与动物细胞相比，植物细胞壁与细胞质折射率不同，而且细胞中含量丰富的色素和芳香类物质使获取的图像信噪比降低。因此，以往对植物细胞的显微观察仅限于深度大约为30μm左右的几层细胞，极大地影响了植物细胞结构和功能的解析。

为了观察植物体更深层的内部结构或亚细胞结构，往往需要经过特殊处理，使植物样品减少厚度及体积，使光线透过样品才能进行显微观察。处理后的材料要求小而薄、完整、透明、保持原结构，又具有颜色容易辨认。为达到上述要求，需要采取不同的制片方法或者在成像之前对植物材料进行透明，以方便观察组织较厚的植物样品，例如烟草和番茄叶片、沙葱叶片等。

发明内容

本发明一个目的是提供一种植物组织显微镜检测前处理的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤A：

1)将植物组织用固定液固定，得到固定后的植物组织；

2)将所述固定后的植物组织用氢氧化钾消化，得到消化后的植物组织；

3)将消化后的植物组织用PHEM溶液洗涤，得到洗涤后植物组织；

4)将所述洗涤后植物组织在透明液中浸没处理，得到透明后的植物组织，实现植物组织显微镜检测前处理；

所述PHEM溶液包括PIPES(对二氮己环-1,4-二(2-乙磺酸))、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)、EGTA和MgCl₂；

所述透明液由尿素、丙三醇、Triton X-100和所述PHEM溶液组成；

上述方法中，

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为40-80：15-35：5-15：1-3；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为60：25：15：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为60：25：10：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩尔的量比为40：15：5：1；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为4-8mol：20-40ml：0.05-0.15g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为6mol：20ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为6mol：30ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比为4mol：20ml：0.1g。

上述方法中，