[发明专利]一种检测聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染试剂盒，该试剂盒包括：试剂A：该试剂为水溶液，且每一升该水溶液中具有冰醋酸3～5mL、硝酸银1～3g和乙醇50～100mL；试剂B：该试剂为水溶液，且每一升该水溶液中具有氯化钠0.5～1g、亚硫酸钠0.5～2.5g、碳酰肼0.1～0.3g、碳酸钠2～10g和葡萄糖5～10g；试剂C：该试剂为水溶液，且每一升该水溶液中具有冰醋酸3～5mL。本试剂盒不仅摈弃了危害人体健康的甲醛，而且具有检测的灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及聚丙酰胺凝胶电泳方法中检测DNA的银染试剂。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶的银染法是检测DNA分子标记的常用方法之一，该方法具有高的灵敏度和高的分辨率，可区分1个碱基的差异【Sambrook J,Fritsch EF,ManiatisT.Molecular Cloning:A laboratory manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989,304-306】和鉴别出低至27.8pg的DNA【An Z,Xie L,Cheng H,Zhou Y,Zhang Q,He X,Huang H.A silver staining procedure for nucleic acids in polyacrylamide gelswithout fixation and pretreatment.Anal Biochem,2009,391:77-79】。但从目前业已报道的检测PCR扩增产物的传统经典银染方法【Bassam BJ,Caetano AG,Gresshoff PM.Fastand sensitive silver staining of DNA in polyacrylamide gels.Anal Biochem,1991,196(1):80-83)及改良银染方法(Liang Q,Wen D,Xie J,Liu L,Wei Y,Wang Y,ShiS.A rapid and effective method for silver staining of PCR products separatedin polyacrylamide gels.Electrophoresis,2014,35(17):2520-2523】所需试剂来看，甲醛是现在所有银染方法显色步骤中的必需试剂，使用浓度在370～1480mg/L之间【郭培国,刘文杰,李海洋,王直亮,夏岩石,李荣华.一种快速有效检测SSR标记的聚丙烯酰胺凝胶的银染方法.广州大学学报(自然科学版)，2016，(4):1-6】。

众所周知，甲醛是一种易溶于水的高刺激性有毒气体，在常温下易挥发；环境中的甲醛属于一种严重影响人类健康的污染物。它对人体的危害主要包括(1)刺激作用：主要表现在对皮肤黏膜的刺激作用，且能与蛋白质的氨基结合，高浓度吸入时出现呼吸道严重的刺激和水肿、眼刺激和头痛等症状；(2)致敏作用：主要表现在皮肤直接接触甲醛可引起过敏性皮炎、色斑、组织细胞坏死；(3)致突变作用：属于基因毒性物质，是潜在的强致突变物之一，如可引起鼻咽肿瘤等(闫金萍.甲醛及其对人体的危害.化学世界，2004(10):558-559)。因其毒性较大，目前世界卫生组织(WHO)和美国环境保护局(EPA)均将甲醛列为潜在危险致癌物和重要环境污染物(徐向荣和徐增康.甲醛的危害及其卫生检验方法.职业与健康，2003,19(12):47-49)；在我国有毒化学品优先控制名单中，甲醛高居第二位【周雪媚，李玉光，陈霜玲，付慧群，姜思朋，王永.一株高效甲醛降解菌的分离筛选与降解特性研究.生态环境学报，2015,24(12):2040-2044】。对于利用银染法检测PCR扩增产物的操作人员来讲，长期使用和接触甲醛溶液，人体不可避免吸入挥发在空气中的甲醛、或经皮肤接触导致甲醛侵入人体，从而危害身体健康。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染试剂盒，该试剂盒不仅可替代现有的DNA银染试剂，而且不含对操作人员身体健康有害的甲醛。

本发明解决上述问题的技术方案是：