[发明专利]一种猪牛羊肉快速检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明是一种猪牛羊肉快速检测试剂盒及制备方法，属于免疫层析检测技术领域，具体来说，涉及肉类检测技术领域。

背景技术

食品质量和安全与人类的生存和健康密切相关，是人们达到一定生活质量水平的基本要求，居民不断提高对营养和健康的需求需要高质量的肉类作为保证。伴随着肉类市场的急剧扩大，市面上肉类掺假的事件频频发生，掺假的内容越来越复杂，方式越来越多，不仅产生经济问题，更有甚者可能会对消费者造成伤害等严重后果。现在看来，掺假的手段主要有以次充好，以假乱真。不法企业采用相对廉价的猪肉、鸡肉等肉类原料，通过各种方式的深加工，冒充牛肉、羊肉制品进行销售以牟取不当利益，这严重侵犯了消费者的合法权益。在我国，假冒的牛羊肉卷频频被媒体曝光。有效鉴定肉类掺假技术的缺乏是困扰肉制品安全监管的难题之一。传统方法对肉的种源进行鉴别主要依赖于形态学和感官检验。感官检验局限性大、准确度低，对加工过的肉丸等基本无法鉴别。因此现在市场上迫切地需要一种价格低廉、易于操作、准确性高的鉴别方法，来提高检测的准确度和检验的速度。用技术手段为监管部门提供科学依据，打击日益猖獗的肉类掺假违法行为。因此本研究欲建立一种适合广大基层检验人员现场快速鉴别肉类品种的方法。

目前国内外主要的肉类鉴别现代技术方法为测定DNA序列的PCR法，蛋白质组学、光谱法、生物标记物法，电磁波法也有报道，但只有PCR法被广泛应用。上述的各项技术所需的技术要求高、仪器昂贵、对人员要求高、检测时间长，并不适合进行基层检验。目前在我国最广泛使用的方法还是感官鉴别，完全依靠检验者的经验。感官鉴别的误差较大，容易误判，因此现在市场上迫切需要一种价格低廉、易于操作、准确性高的鉴别方法，来提高检测的准确度和检验速度，用技术手段为监管部门提供科学依据，打击日益猖獗的肉类掺假违法行为。

免疫层析技术广泛用于疾病标记物检测、食品检测、科学研究等多个领域。采用免疫层析分析技术鉴别肉类种类国内外鲜见研究，通过提取分离各种肉类的特异性蛋白和制备多克隆抗体、单克隆抗体，制备出快速免疫检测试剂盒是本专利的技术特征。

发明内容

发明目的：提供一种猪牛羊肉快速检测试剂盒，用于快速鉴别肉的种类。

技术方案：

一种猪牛羊肉快速检测试剂盒，该试剂盒采用免疫层析法，用来快速鉴别猪牛羊肉的种类，其特征在于：该试剂盒包括试纸底板；所述试纸底板上一次粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；

所述胶体金垫附着胶体标记的猪、牛、羊各自的特异性单克隆抗体1；

所述的硝酸纤维素膜上包被有猪、牛、羊各自的特异性单克隆抗体2的检测线以及质控线。

所述的猪牛羊肉快速检测试剂盒，优选地：所述的猪、牛、羊各自的特异性单克隆抗体具体为分离纯化出猪、牛、羊肉各自的、区别于其他二种肉的特异性蛋白，再制备的单克隆抗体。

所述的猪牛羊肉快速检测试剂盒，优选地：所述胶体标记的猪、牛、羊各自的特异性单克隆抗体1具体为胶体金分别标记猪、牛、羊各自的特异性单克隆抗体1，再制备成一个胶体金垫。

所述的猪牛羊肉快速检测试剂盒，优选地：所述检测线为在同一硝酸纤维素膜上，依次分别划膜有猪、牛、羊的单克隆抗体2。

一种猪牛羊肉快速检测试剂盒的制备方法，该制备方法的步骤为：

1）取胶体金溶液，以碳酸钾溶液调节pH值为7.6；

2）加入猪、牛、羊单克隆抗体1，搅拌，静置；

3）搅拌的同时滴加BSA；

4）将上述步骤制得的金标抗体低温离心，去除大颗粒，去除上清液中的未标记蛋白，用稀释液复溶；

5）用喷金仪将制备好的金标单克隆抗体喷在同一聚酯膜上，干燥即得胶体金金垫，备用；

6）用划膜仪猪、牛、羊单克隆抗体2依次划在硝酸纤维素膜上，形成三条检测线；将兔抗鼠 IgG划在硝酸纤维素膜上，形成质控线，干燥。

7）将胶体金金垫、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘附于PVC背衬上；将硝酸纤维素膜划检测线的一端与胶体金金垫连接，胶体金金垫另一端与样品垫连接，硝酸纤维素膜划质控线的一端与吸水纸连接，粘贴完成后分切成试纸条；将试纸条压上塑料卡壳，装入带干燥剂的密封塑料袋中，制备完毕。

所述的制备方法，优选地：以100ml胶体金溶液计，加入0.5mg的猪、牛、羊单克隆抗体1；滴加2 mL 的 5% BSA，所述稀释液为原体积 1/10的稀释液。

所述的制备方法，优选地：所述步骤5）中每个4x5mm胶体金金垫金标单克隆抗体喷量为400 ng。