[发明专利]一种从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法

权利要求书

1.一种从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，步骤如下：

1)将南极磷虾加入0.5～2倍量水，匀浆，调节pH至6.5，40～45℃条件下加入复合酶水解2～4小时；

2)酶解液固液分离，固体部分经85～100％的碱性乙醇液超声辅助提取2次，每次15～30min，提取液合并后，进行减压抽滤和减压浓缩；

3)搅拌并加热提取浓缩物，向提取浓缩物中缓慢、均匀的掺入蒸馏水，掺水时间为15min，待絮状物沉淀出现停止搅拌，静置12h，离心，沉淀物即为总磷脂；

4)总磷脂用少量二氯甲烷溶解后，过滤，经聚苯乙烯凝胶柱层析，环己烷-乙酸乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，薄层色谱检测后，合并洗脱液，减压浓缩；

5)浓缩物经冰乙醇液洗涤，干燥，得到高纯度磷脂；

所述步骤1)复合酶为菠萝蛋白酶和几丁质酶按重量比为1:2混合。

2.如权利要求1所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，具体地，步骤如下：

1)将南极磷虾加入0.5～2倍量水，匀浆5～20min，调节pH至6.5，40～45℃条件下加入原料重量0.5～1％的复合酶水解2～4小时；

2)酶解液固液分离，固体部分按照质量体积比1:6～1:12加入重量百分比浓度为85～100％的碱性乙醇液超声辅助提取2次；提取液合并后，经减压抽滤和减压浓缩得提取浓缩物；

3)以每分钟60转的速度搅拌提取浓缩物，加热其温度至35℃，降低搅拌速度至每分钟25转，缓慢、均匀的掺入蒸馏水，掺水时间为15min，掺水后，搅拌速度恢复至每分钟60转，待絮状物沉淀出现停止搅拌，静置12h，离心，沉淀物即为总磷脂；

4)总磷脂用少量二氯甲烷溶解后，过滤，经Bio-Beads S-X₈聚苯乙烯凝胶柱层析，环己烷洗脱除去小极性杂质后，环己烷-乙酸乙酯按1:1的比例洗脱，洗脱速度为每小时0.5～1.5倍柱体积；收集洗脱液，薄层色谱检测后，合并洗脱液，减压浓缩；

5)浓缩物按照质量体积比1:0.5～1:2加入55～65％的冰乙醇液洗涤，干燥，得到高纯度磷脂。

3.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，所述步骤2)碱性乙醇液的乙醇比例为90～95％，pH为9.0～10.0。

4.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，所述步骤2)超声功率为30～40KHZ，超声温度为25～40℃，每次超声时间为15～30min。

5.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，所述步骤3)蒸馏水的掺入量为提取浓缩物重量的3％，水温为30℃。

6.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，所述步骤2)和4)中所述的减压浓缩温度为40～50℃。

7.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，所述步骤4)薄层分析检测条件为：正相GF254硅胶薄层板；展开剂为10:11.3:11.7:2.7的二氯甲烷-无水乙醇-三乙胺-水体系；显色剂为10％浓硫酸-乙醇溶液；110℃加热显色。

8.如权利要求1或2所述的从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法，其特征是，磷脂的纯度在95％以上。