[发明专利]DNA文库的制备方法以及试剂盒

权利要求书

1.DNA文库的制备方法，其包括预文库和终文库的制备过程，其中所述的预文库制备过程包括DNA的制备、末端修复和3’端加A，接头连接，接头连接产物纯化，预文库扩增，扩增的预文库纯化，所述的终文库制备过程包括预文库杂交，捕获洗脱，终文库制备，以及终文库的纯化过程；其中所述预文库杂交过程中使用双向短链阻断剂；所述的双向短链阻断剂结构如下：

2.权利要求1所述的制备方法，其中所述的末端修复和3’端加A在一个反应体系中进行。

3.权利要求2所述的制备方法，其中末端修复和3’端加A的反应体系含有ER&AT缓冲液，ER&AT酶，以及cfDNA。

4.权利要求3所述的制备方法，其中末端修复和3’端加A的反应体系条件为：

20℃ 30分钟(85℃热盖)

65℃ 30分钟(85℃热盖)

4℃ 维持。

5.权利要求2-4任一项权利要求所述的制备方法，其中末端修复和3’端加A的反应体系中ER&AT缓冲液：ER&AT酶：cfDNA的体积比为7：3：50。

6.权利要求1所述的制备方法，其中捕获洗脱步骤中用链霉亲和磁珠进行捕获。

7.权利要求6所述的制备方法，其中链霉亲和磁珠量较常规方法使用量减少一半。

8.权利要求6所述的制备方法，其中接头连接产物纯化过程中连接反应体系和磁珠体积比为1：0.8。

9.权利要求1所述的制备方法，其中扩增的预文库纯化过程中PCR体积和磁珠体积比为1：1.2。

10.权利要求1所述的制备方法，其中的DNA文库为cfDNA文库、白细胞gDNA文库或组织来源的DNA文库。

11.权利要求1所述的制备方法，其中还进一步包括纯化的预文库或终文库的质检、纯化的预文库或终文库的片段大小检测过程。

12.权利要求10或11所述的制备方法，其中在进行白细胞gDNA或组织来源的DNA文库构建时，还涉及打断时间、打断稀释液、以及漂洗缓冲液吹打位置的优化。

13.双向短链阻断剂在制备用于DNA文库捕获试剂盒中的用途，其中所述双向短链阻断剂结构如下所示：

14.权利要求13的用途，其中所述DNA文库为cfDNA文库、白细胞gDNA文库或组织来源的DNA文库。