[发明专利]化合物cytosporaphenoneA及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及利用植物内生真菌Cytospora rhizophorae A761制备cytosporaphenone A的方法，化合物cytosporaphenone A及其在制备抗肿瘤药物中的应用和作为抗肿瘤药物活性成份方面的应用。

背景技术：

癌症是目前危害人类健康的主要疾病之一。国际抗癌联盟发布的数据表明，2008年，全球有1270万人患癌，死亡人数高达760万。世界范围内因癌症死亡的人数，比艾滋病、疟疾和结核病加起来还要多。如果不采取有效的措施，预计到2030年，每年将出现2600万新增癌症病例，癌症死亡人数将达1700万。我国癌症发生率正处于快速上升时期，每年癌症发病人数约260万，死亡180万。癌症已成为中国城市和农村居民的第一死因，癌症带来的经济负担和对社会发展的不良影响也日益突显。在癌症的三大疗法中，药物治疗占有主要位置。

植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(Tan RX and Zou WX,2001)。内生真菌物种丰富多样，它们处于植物内部的特殊环境中，能够产生各种结构的次生代谢产物，其化合物的结构类型远远超出其植物代谢产物的范围，容易从中发现新颖结构的化合物，并且具有多种生物活性，因此内生真菌已成为发现新天然活性物质的重要资源，在农业和医药工业中具有重要的应用潜力(施琦渊等，2007)。

巴戟天(Morinda officinalis)为茜草科多年生攀援木质藤本植物，是我国著名的四大南药之一，有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿的作用，用于阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软等症(国家药典委员会，2000)。现代研究表明，巴戟天含有蒽醌类、环烯醚萜苷萜、有机酸类、糖类、甾醇类(林美珍等，2010)。现代药理研究表明，巴戟天具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、消炎镇痛等广泛药理作用(徐吉银等，2006)。因此，从巴戟天内生真菌发现的具有抗肿瘤活性作用的新化合物cytosporaphenone A可为新药研发提供化学实体。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种具有抗肿瘤活性的化合物cytosporaphenone A。

本发明的化合物cytosporaphenone A，其结构式如式(Ⅰ)所示：

本发明的第二个目的是提供一种化合物cytosporaphenone A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：化合物cytosporaphenone A是从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae A761的发酵培养物中分离制备得到的。

所述的化合物cytosporaphenone A从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae A761的发酵培养物中分离制备得到的，具体步骤如下：

(1)制备巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae A761的发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取菌丝体干燥后粉碎用乙醇或乙醇水溶液浸提，浓缩浸提液至无乙醇，再用水悬浮，悬浮液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后得浸膏；

(2)浸膏经C₁₈反相柱层析，用甲醇-水作为洗脱剂，从体积比30:70至100:0梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为40:60洗脱下来的馏分，经凝胶柱层析Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇体积比1:1作为洗脱剂洗脱，再经纯化后得到化合物cytosporaphenone A。

所述的步骤(1)制备巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae A761的发酵培养物具体步骤为：挑取Cytospora rhizophorae A761的菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28℃、120r/min条件下培养5天，制得种子液，然后将种子液按10％的接种量接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃、120r/min条件下培养7天，而制得Cytospora rhizophorae A761的液体发酵培养物，所述的马铃薯葡萄糖液体培养基，每升是通过以下方法配制的：用500mL的纯水煮200g的马铃薯，煮沸20min，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、KH₂PO₄ 3g、MgSO₄ 1.5g、维生素B₁ 10mg、用水补足至1000mL。

所述的乙醇水溶液优选为体积分数98％的乙醇水溶液。