[发明专利]XI型成骨不全致病基因FKBP10的突变位点及其应用

权利要求书

1.一种XI型成骨不全的检测试剂盒，其特征在于，包括拷贝数变异检测部分和杂合突变检测部分，拷贝数变异检测部分包括： XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子2的扩增引物和检测探针，XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子3的扩增引物和检测探针，XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子4的扩增引物和检测探针， 以及数字化PCR的常规溶液；杂合突变检测部分包括： XI型成骨不全致病基因FKBP10的突变位点的扩增引物和测序引物，以及PCR溶液、PCR产物纯化试剂和Sanger测序试剂；所述XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子2的扩增引物和检测探针，该扩增引物为一对，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示， 检测探针核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，检测探针5’端连接有FAM荧光标记，3’端连接有BHQ1淬灭基团；

所述XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子3的扩增引物和检测探针，该扩增引物为一对，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，检测探针核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，检测探针5’端连接有FAM荧光标记，3’端连接有BHQ1淬灭基团；所述XI型成骨不全致病基因FKBP10外显子4的扩增引物和检测探针，该扩增引物为一对，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.9所示，检测探针核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，检测探针5’端连接有FAM荧光标记，3’端连接有BHQ1淬灭基团；

所述XI型成骨不全致病基因FKBP10的突变位点的扩增引物和测序引物，该扩增引物为一对，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示， 测序引物核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，XI型成骨不全致病基因FKBP10的突变位点位于FKBP10基因外显子5的-3bp处，该处核苷酸由C突变为G，突变后该突变所在的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述数字化PCR的常规溶液包括2×ddPCR Supermix，去RNase酶与DNase酶水以及微滴发生油。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，PCR溶液包括：2.5mM dNTP，含Mg²⁺的10×PCR缓冲液，5U/μl TaqDNA聚合酶，去RNase酶与DNase酶水；PCR产物纯化试剂包括：1U/μlSAP酶，10U/μl ExoI酶，去RNase酶与DNase酶水。

5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述Sanger测序试剂包括：BigDye3.1混合液、0.125M EDTA溶液、无水乙醇、体积百分比为75％的乙醇溶液，去RNase酶与DNase酶水、Hi-Di甲酰胺溶液。