[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的方法

权利要求书

1.一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的发酵方法，其特征在于，

(1)菌种培养：将工程菌株活化后接种到种子培养基培养，获得一级种子和/二级种子；

(2)D-核糖发酵：将步骤(1)培养好的一级或二级种子以体积百分数1-10％的接种量接种到发酵罐中，罐中装液量55-65％，35-40℃进行通风搅拌培养，培养过程中，通过流加物料控制pH在5-7，通过调节搅拌转速和通风比，保持发酵液中相对溶解氧浓度10-50％；补料时流加物料为按一定比例配制的葡萄糖和葡萄糖酸内酯进行代谢流的调控，葡萄糖和葡萄糖酸内酯两者重量比例为(2-4)：(4-6)，控制发酵过程总碳源添加量为120-150g/L；发酵初始培养基组成为：葡萄糖120-150g/L，酵母浸提物3-6g/L，玉米浆5-10g/L，(NH₄)₂SO₄ 2-3g/L，MgSO₄2g/L，MnSO₄ 0.2g/L，pH 6.0-7.2；发酵过程中流加物料组成为：葡萄糖200-400g/L，葡萄糖酸内酯600-400g/L，酵母浸提物0.5-1g/L；

所述枯草芽孢杆菌工程菌为枯草芽孢杆菌SFA-H43菌株中转酮酶基因终止密码子前500bp序列，替换为枯草芽孢杆菌SFR-4菌株的转酮酶基因终止密码子前500bp序列获得的工程菌；

所述枯草芽孢杆菌工程菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌SFR-43T，该菌株于2016年11月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌珞珈山，保藏号为：CCTCC M 2016666。

2.根据权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的发酵方法，其特征在于，步骤(1)菌种培养：取35-40℃培养2-3天工程菌株的新鲜斜面，用接种环取1-2环斜面菌种，接种到50ml液体种子培养基中，35-40℃，150-200rpm，摇瓶培养10-16小时，是为一级种子；将一级种子以体积百分数1-10％的接种种子培养基，35-40℃培养6-12小时，是为二级种子。

3.根据权利要求2所述的一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的发酵方法，其特征在于，斜面培养所用的斜面菌种培养基的组成为：酵母浸提物5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl3g/L，琼脂20g/L，其余为水，pH7.0-7.2；

液体一级种子培养基的组成为：葡萄糖20-40g/L，酵母浸提物2-10g/L，玉米浆8-12g/L，pH 7.0-7.2；

二级种子培养基的组成为：葡萄糖30-60g/L，酵母浸提物2-10g/L，玉米浆8-12g/L，(NH₄)₂SO₄ 2-3g/L，MgSO₄ 2g/L，pH 7.0-7.2。

4.根据权利要求3所述的一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的发酵方法，其特征在于，一级种子培养基培养的时间为12-14小时；

所述二级种子培养基培养的时间为6-8小时；

发过程培养温度为36-38℃；

发酵罐发酵过程pH控制在5.5-6.5；

发酵罐发酵过程溶解氧浓度保持在20-30％。

5.根据权利要求4所述的一种利用枯草芽孢杆菌工程菌高产D-核糖的发酵方法，其特征在于，所述流加物料组成为：葡萄糖200-300g/L，葡萄糖酸内酯600-500g/L，酵母浸提物0.4-0.6g/L。