[发明专利]一种原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法

权利要求书

1.一种原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，所述方法操作如下：

步骤（1）将已死亡新生小鼠或大鼠消毒、解剖后取出脊柱，剔除脊柱上肌肉，剪开脊柱，在体视显微镜下清理血管和脊髓并取出DRG，剔除DRG上的神经纤维和被膜；

步骤（2）将处理好的DRG采用DRG-SGCs培养液培养，诱导卫星胶质细胞从DRG中迁出，培养结束后进行细胞传代，加入胰蛋白酶消化，然后加入FBS终止消化，采用巴氏吹吸管轻轻吹打后，转移至离心管中进行离心；

步骤（3）离心后弃上清液，然后加入DRG-SGCs培养液接种在多聚赖氨酸包被过的六孔培养板继续培养，得到卫星胶质细胞；

所述DRG-SGCs培养液成分包括DMEM/F12、B27、青霉素-链霉素双抗、L-谷氨酰胺、牛血清白蛋白BSA、神经调节蛋白NRG1-β1、地塞米松、胰岛素Insulin、三碘甲状腺氨酸钠T3和四碘甲状腺原氨酸T4；

每50mL DRG-SGCs培养液中DMEM/F12含量为46~48mL，B27含量为0.8~1.2 mL，青霉素-链霉素双抗含量为0.4~0.6 mg，L-谷氨酰胺含量为0.4~0.6 mg，BSA含量为15mg~20mg，NRG1-β1含量为1~1.2ug，地塞米松含量为1.8~2ug ，Insulin含量为280~300ug，T3含量为0.5~0.6ug ，T4含量为20~24ug。

2.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，所述新生小鼠或大鼠为出生0~24小时的乳鼠。

3.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，将步骤（2）处理好的DRG接种在六孔培养板中，六孔培养板内有DRG-SGCs培养液，每个孔接种8~11个背根节，然后在36~38℃，5%CO₂培养箱中培养。

4.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，步骤（2）将处理好的DRG在培养过程中随着DRG中迁出的卫星胶质细胞占据六孔培养板底部85%以上时停止培养。

5.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，步骤（2）将将处理好的DRG采用DRG-SGCs培养液连续培养一次后，再转移至新的DRG-SGCs培养液中，可再次诱导卫星胶质细胞从DRG中迁出。

6.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于， 步骤（2）培养结束后加入2.5%胰蛋白酶消化2~4min，然后加入10%FBS终止消化。

7.如权利要求1所述的原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法，其特征在于，步骤（2）离心转速为1000~1200rmp，离心时间为5~7分钟。

8.一种如权利要求1~7任一所述方法中采用的DRG-SGCs培养液。