[发明专利]体外定量测定vWF-CP酶活性的方法、检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种体外定量测定vWF-CP酶活性的非疾病诊断和治疗的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、试纸条制备：将样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫依次组装，所述NC膜上设置有检测线和质控线，所述金标垫、检测线和质控线上分别包被有金标抗体、T线抗体和C线抗体；

S2、反应液制备：将标准品1、标准品2、待测样品分别与vWF-CP底物混合反应一段时间后终止反应；

S3、显色反应：将各反应液分别加入至试纸条的样品垫，一段时间后扫描各试纸条的检测线读数值；

S4、酶活性计算：将待测样品显色反应后的检测线读数值与标准品1和标准品2显色反应后的检测线读数值进行比较，计算得到待测样品中vWF-CP酶活性；

其中，所述金标抗体为胶体金标记的抗vWF-CP底物抗体，所述T线抗体为抗vWF-CP底物抗体，所述C线抗体为抗金标抗体抗体，所述金标抗体与T线抗体结合vWF-CP底物上不同的位点；

所述标准品1和标准品2分别为高vWF-CP酶相对活性和低vWF-CP酶相对活性的制品；

所述vWF-CP底物包括vWF功能区氨基酸序列，并在vWF功能区氨基酸序列的N端和C端分别结合有HIS标签氨基酸序列和FLAG标签氨基酸序列，所述vWF功能区氨基酸序列为vWF73，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述vWF-CP底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的体外定量测定vWF-CP酶活性的非疾病诊断和治疗的方法，其特征在于：所述标准品1和标准品2为vWF-CP酶相对活性分别为0％和100％的制品。

3.根据权利要求1所述的体外定量测定vWF-CP酶活性的非疾病诊断和治疗的方法，其特征在于：所述T线抗体为抗FLAG标签鼠单克隆抗体，所述C线抗体为二抗羊抗鼠IgG，所述金标抗体为胶体金标记抗HIS标签鼠单克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的体外定量测定vWF-CP酶活性的非疾病诊断和治疗的方法，其特征在于：所述步骤S4中酶活性按下列公式进行计算：

5.一种体外定量测定vWF-CP酶活性的检测试剂盒，其特征在于：包括试纸条、标准品1、标准品2、vWF-CP底物、工作液和终止液，其中，

所述试纸条包括依次组装的样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫，所述NC膜上设置有检测线和质控线，所述金标垫、检测线和质控线上分别包被有金标抗体、T线抗体和C线抗体，所述金标抗体为胶体金标记的抗vWF-CP底物抗体，所述T线抗体为抗vWF-CP底物抗体，所述C线抗体为抗金标抗体抗体，所述金标抗体与T线抗体结合vWF-CP底物上不同的位点；

所述标准品1和标准品2分别为高vWF-CP酶相对活性和低vWF-CP酶相对活性的制品；

所述工作液为含二价金属离子的缓冲液，所述终止液为含能络合二价金属离子的缓冲液；

所述vWF-CP底物包括vWF功能区氨基酸序列，并在vWF功能区氨基酸序列的N端和C端分别结合有HIS标签氨基酸序列和FLAG标签氨基酸序列，所述vWF功能区氨基酸序列为vWF73、其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述vWF-CP底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.根据权利要求5所述的体外定量测定vWF-CP酶活性的检测试剂盒，其特征在于：所述标准品1和标准品2为vWF-CP酶相对活性分别为0％和100％的制品。

7.根据权利要求5所述的体外定量测定vWF-CP酶活性的检测试剂盒，其特征在于：所述T线抗体为抗FLAG标签鼠单克隆抗体，所述C线抗体为二抗羊抗鼠IgG，所述金标抗体为胶体金标记抗HIS标签鼠单克隆抗体。