[发明专利]一种氧化还原敏感型VEGF‑siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒及其制备

权利要求书

1.一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒，其特征在于，包括通过双硫键连接的VEGF-siRNA和鸡卵清蛋白，其中，VEGF-siRNA和鸡卵清蛋白的质量比为10～100:1。

2.根据权利要求1所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒，其特征在于，其粒径为50～300nm。

3.根据权利要求1所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒，其特征在于，所述的VEGF-siRNA为双链RNA，其中一条链的核苷酸序列为如序列表1所示，另一条链的核苷酸序列如序列表2所示。

4.根据权利要求3所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒，其特征在于，所述的VEGF-siRNA经巯基化修饰，再还原后，即带有所述双硫键。

5.根据权利要求4所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒，其特征在于，所述的VEGF-siRNA的巯基化修饰位置为5'。

6.如权利要求1～5任一所述的氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取VEGF-siRNA，经巯基化修饰氧化，再还原后，配成氧化还原VEGF-siRNA溶液；

(2)取步骤(1)中配成的VEGF-siRNA溶液与鸡卵清蛋白溶液混合，热聚反应，即得到目的产物。

7.根据权利要求6所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中巯基化修饰的VEGF-siRNA的还原过程为：

(a)取TCEP溶液作为还原剂，与巯基化修饰的VEGF-siRNA混合，再依次加入醋酸钠溶液和无水乙醇，混合，静置；

(b)将静置后的溶液分离除去无水乙醇，干燥后，加入无酶水，即配成所述氧化还原VEGF-siRNA溶液。

8.根据权利要求7所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(a)中TCEP溶液的浓度为0.1M，醋酸钠溶液的浓度为3M，加入的TCEP溶液、巯基化修饰的VEGF-siRNA、醋酸钠和无水乙醇的比例为(50-1000)μL：1OD：(10-200)μL：(0.5-5)mL；

静置温度为-20℃，时间为20min；

步骤(2)中所述的鸡卵清蛋白溶液采用无酶水配制而成，其浓度为0.5mg/L。

9.根据权利要求6所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(2)中热聚反应的温度为50-90℃，反应时间为0.5-20分钟。

10.根据权利要求6所述的一种氧化还原敏感型VEGF-siRNA/鸡卵清蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，在进行热聚反应时，还需加入pH范围为5.5-6.7的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液。