[发明专利]快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法

权利要求书

1.一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其特征在于步骤如下：

（1）无毒条件下无菌外植体的获得：将偏穗鹅观草种子置于50%~55%的浓硫酸中,在条件为28℃~30℃，210 r/min~220 r/min的摇床里振荡0.9~1.2小时做脱皮催芽处理，之后用蒸馏水洗去浓硫酸并置于超净工作台，首先用无菌水清洗种子，然后用75%的酒精振荡冲洗2.5~3.5min，紧接着用无菌水将种子表面的酒精清洗干净，再用20%~25%的次氯酸钠振荡冲洗14~16min,最后用无菌水将种子表面的次氯酸钠清洗干净，获得偏穗鹅观草无菌种子，将灭菌后的种子放置于培养无菌实生苗的培养基中培养10-15 d，获得无菌实生苗的下胚轴幼嫩部分作为诱导愈伤的外植体；

（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）获得的无菌实生苗下胚轴横切为0.3-0.5cm长的小段作为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养25-30d，诱导愈伤发生；

（3）愈伤组织增殖培养：将步骤（2）获得的颜色黄绿，质地疏松的愈伤组织切割成直径为0.1-0.2cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养25-30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色黄绿，结构致密的优良愈伤组织材料；

所述步骤（1）中所述的培养无菌实生苗的培养基为MS营养液、5-7 g/L琼脂、20-30g/L蔗糖、0.05-0.1g/L肌醇组成，pH=5.7-5.8；步骤（2）中所述的诱导愈伤组织培养基、步骤（3）中所述的诱导愈伤组织增殖培养基均为MS诱导培养基，其配比为：3.0-5.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸， 5-7 g/L 琼脂，20-30g/L蔗糖，0.05-0.1g/L肌醇组成，pH=5.7-5.8。

2.如权利要求1所述的快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其特征在于：所述的步骤（1）中偏穗鹅观草发芽阶段需暗培养，发芽以后阶段及步骤（2）、（3）的下胚轴愈伤诱导和愈伤增殖均在连续光照培养，光照强度在1500-2000 lx之间，湿度60-70%的环境下进行。

3.如权利要求1所述的快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其特征在于还包括有步骤（3）所述的产生的愈伤组织材料，通过称量法测定愈伤组织的生长量,其具体步骤为：

1)将盛有MS诱导培养基的锥形瓶放在天平上进行称量，得到数值a;

2)将1）中称量过的锥形瓶放入超净工作台中进行愈伤组织的转接，转接结束后对锥形瓶进行称量，得到数值b;

3)将转接后的愈伤组织培养30天后再次对锥形瓶进行称量，得到数值c;

4)愈伤组织的生长量为：c-(b-a)。