[发明专利]快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法

说明书

本发明涉及一种植物愈伤组织诱导及培养的方法，尤其是一种偏穗鹅观草无毒条件下种子消毒及快速诱导繁殖其无菌实生苗下胚轴愈伤组织的方法。一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其主要特点在于步骤如下：(1)无毒条件下无菌外植体的获得：(2)愈伤组织诱导：(3)愈伤组织增殖培养：将步骤(2)获得的颜色黄绿，质地疏松的愈伤组织切割成直径约0.1‑0.2cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养25‑30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色黄绿，结构致密的优良愈伤组织材料。该方法能够在无毒条件下进行偏穗鹅观草的种子消毒并且快速诱导出其无菌实生苗下胚轴的愈伤组织，经过继代繁殖后，获得大量颜色黄绿，结构松脆的优良愈伤组织材料，可为偏穗鹅观草下胚轴组织培养以及细胞悬浮培养提供技术支撑。

技术领域

本发明涉及一种植物愈伤组织诱导及培养的方法，尤其是一种偏穗鹅观草无毒条件下种子消毒及快速诱导繁殖其无菌实生苗下胚轴愈伤组织的方法。

背景技术

愈伤组织的培养是植物组织培养过程中的一个重要阶段，愈伤组织是幼嫩的薄壁细胞，具有潜在的分化能力，可以进一步分化形成完整植株，通过愈伤的培养也可获得不同性质的愈伤组织，可为原生质体的分离，融合或遗传转化提供优质材料。偏穗鹅观草(Roegneria komarovii(Nevski)Nevski)为禾本科鹅观草属多年生草本植物，原产于中国，除新疆、青海、西藏外，分布遍及全国。多生长在海拔100-2300米的山坡和湿润草地。此种植物可作牲畜的饲料，叶质柔软而繁盛，产草量大，可食性高。目前对无毒条件下进行种子消毒并快速诱导偏穗鹅观草无菌实生苗下胚轴愈伤组织的相关报道还比较少。当前急需一种以无升汞处理偏穗鹅观草种子并以其无菌苗下胚轴为外植体诱导愈伤从而使其增殖的方法，通过人工控制环境条件来产生大量的愈伤组织，并进一步培养使其增殖，为偏穗鹅观草与小麦体细胞杂交做准备，从而将其优良性状导入小麦，以期为小麦遗传育种及研究提供中间材料。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草无菌实生苗下胚轴愈伤组织的方法，该方法简单易行，能够高效快速的获得大量偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织。

以无菌培养获得的偏穗鹅观草下胚轴为外植体，诱导愈伤组织发生，然后继代培养，使其增殖。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其主要特点在于步骤如下：

(1)无毒条件下无菌外植体的获得：将偏穗鹅观草种子置于50％～55％的浓硫酸中,在条件为28℃～30℃，210r/min～220r/min的摇床里振荡0.9～1.2小时做脱皮催芽处理，之后用蒸馏水洗去浓硫酸并置于超净工作台，首先用无菌水清洗种子，然后用75％的酒精振荡冲洗2.5～3.5min，紧接着用无菌水将种子表面的酒精清洗干净，再用20％～25％的次氯酸钠振荡冲洗14～16min,最后用无菌水将种子表面的次氯酸钠清洗干净，获得偏穗鹅观草无菌种子，将灭菌后的种子放置于培养无菌实生苗的培养基中培养10-15d，获得无菌实生苗的下胚轴幼嫩部分作为诱导愈伤的外植体；

(2)愈伤组织诱导：将步骤(1)获得的无菌实生苗下胚轴横切为约0.3-0.5cm长的小段作为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养25-30d，诱导愈伤发生；

(3)愈伤组织增殖培养：将步骤(2)获得的颜色黄绿，质地疏松的愈伤组织切割成直径为0.1-0.2cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养25-30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色黄绿，结构致密的优良愈伤组织材料。